腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子轉(zhuǎn)染脂肪間充質(zhì)干細胞治療大鼠急性脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、目的:通過觀察行BDNF基因修飾后,大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的生物學變化;并將其應用于急性脊髓損傷大鼠的治療,觀察大鼠運動功能的變化,追蹤移植細胞在體內(nèi)遷移及及脊髓損傷部位生長分化情況,檢測組織學改變和神經(jīng)生長因子的表達,探討B(tài)DNF轉(zhuǎn)染脂肪來源間充質(zhì)干細胞用于大鼠急性脊髓損傷的可行性及可能機制。
　　方法:選擇實驗大鼠,分離大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞,觀察其生物學特征,行BrdU標記以利于移植后體內(nèi)示蹤,并行腺病毒BDNF基因轉(zhuǎn)染。36只

2、SD大鼠隨機分為三組:脊髓損傷對照組、ADSCs治療組及BDNF轉(zhuǎn)染的ADSCs治療組。在脊髓損傷部位行相應處理:A組動物,植入明膠海綿;B組動物,植入含3.0ml(3x107個/ml) ADSCs的明膠海綿;C組動物:植入含3.0ml(3x107個/ml)轉(zhuǎn)染ADSCs的明膠海綿。術(shù)后第28d麻醉處死所有動物,取損傷部位脊髓組織,部分用于HE染色,普通光鏡下觀察組織學改變;部分處理后行免疫熒光染色;另一部分深低溫保存行BDNF表達檢查

3、。
　　結(jié)果:成功分離并培養(yǎng)ADSCs,可于體外穩(wěn)定增殖。對ADSCs行不同濃度的BrdU標記,其中10、15μmol/L組標記率相較20、25、30μmol/L組較低。BrdU標記率在48h時標記率達到多可達到90％以上。脊髓損傷后1d,三組間動物運動功能評分沒有顯著性差異(P>0.05)。術(shù)后7天、14天、28天,各組大鼠的BBB評分逐漸增高,其中BDNF-ADSCs組運動功能評分明顯高于其他兩組。組織學結(jié)果顯示脊髓損傷組脊髓

4、有空洞形成,神經(jīng)元細胞數(shù)量較少;ADSCs組受損局部空洞較小,神經(jīng)元細胞較多;脊髓損傷轉(zhuǎn)染細胞治療組脊髓組織結(jié)構(gòu)正常,胞體和突起清晰可見,神經(jīng)元形態(tài)完好。免疫熒光顯示,移植脂肪干細胞脊髓組織內(nèi),均不同程度的可見分布有BrdU陽性標記細胞;熒光染色提示部分BrdU陽性的移植細胞同時呈GFAP陽性。Western-Blot結(jié)果顯C組BDNF表達水平明顯升高(P<0.05)表達量最高。B組表達水平較高,A組表達水平最低(P<0.05)。