微泡增強(qiáng)的超聲空化對(duì)前列腺的損傷作用.pdf

1、背景
　　 良性前列腺增生癥(benign prostate hyperplasia,BPH)是老年男性的常見(jiàn)病、多發(fā)病,50歲時(shí)男性發(fā)病率超過(guò)50％,80歲時(shí)可達(dá)到90％。BPH所引起的排尿困難嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量,最終導(dǎo)致膀胱及腎功能的損害。前列腺增生目前缺乏有效而又非創(chuàng)傷性的治療方法,目前臨床應(yīng)用和研究較多的有經(jīng)尿道前列腺電切和各種熱消融,然而,各種經(jīng)尿道前列腺微創(chuàng)治療仍具有一定創(chuàng)傷性,并存在諸如急性尿潴留、出血、尿失

2、禁、感染等并發(fā)癥。因此,探索一種新的有效又非創(chuàng)傷性的BPH治療方法十分必要。
　　 超聲空化效應(yīng)是熱效應(yīng)以外另一超聲主要的物理效應(yīng),主要表現(xiàn)為沖擊波、微射流等機(jī)械性損傷,可以導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增高(聲孔效應(yīng)),嚴(yán)重時(shí)發(fā)生血管壁破裂出血等。本研究建立在以往超聲空化研究基礎(chǔ)上,希望通過(guò)用微泡增強(qiáng)的超聲空化效應(yīng),機(jī)械性損傷動(dòng)物前列腺組織,改善其微血管通透性,初步探討一種新的非創(chuàng)傷性治療前列腺增生的方法。
　　 研究目的
　

3、　 1.超聲空化損傷前列腺的可能性:采取分組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)考查超聲和微泡兩因素在新西蘭白兔及雜種犬前列腺空化損傷中的作用,通過(guò)大體、顯微病理和超微病理觀察各組前列腺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的病理變化。
　　 2.前列腺微血管通透性研究:以伊文思藍(lán)為循環(huán)示蹤劑,定量分析各組前列腺組織治療后的伊文思藍(lán)濃度,以反映前列腺損傷后微血管通透性變化。
　　 3.超聲空化誘導(dǎo)前列腺凋亡的研究:應(yīng)用TINEL法鑒定判斷各實(shí)驗(yàn)組兔前列腺腺體上皮細(xì)胞凋亡表

4、達(dá)水平。
　　 材料與方法
　　 第一部分
　　 1.動(dòng)物分組
　　 30只健康8月齡雄性成熟新西蘭大白兔,隨機(jī)分為單純超聲組(US)、微泡假照組(MB)及超聲微泡治療組(US+MB)。
　　 2.前列腺微血管通透性實(shí)驗(yàn)
　　 每組各5只雄性新西蘭大白兔。動(dòng)物麻醉后,手術(shù)開(kāi)腹充分暴露前列腺前方的精囊,經(jīng)耳緣靜脈注射2％伊文思藍(lán)(50mg/kg)和微泡造影劑(0.1ml/kg)后,通過(guò)精囊輻

5、照其后方的兔前列腺10分鐘,US組僅作單純超聲輻照10分鐘,MB組只注射同劑量“脂氟顯”微泡混懸液。術(shù)后經(jīng)腹主動(dòng)脈灌注肝素化生理鹽水沖洗循環(huán)伊文思藍(lán)(Evans Blue,EB),并通過(guò)甲酰胺淬取出前列腺組織中的伊文思藍(lán),檢測(cè)單位質(zhì)量前列腺的伊文思藍(lán)含量,以評(píng)價(jià)超聲空化對(duì)前列腺損傷后通透性改變的情況。
　　 3.病理觀察實(shí)驗(yàn)
　　 每組各5只雄性新西蘭大白兔。治療方法同上,但不注射伊文思藍(lán)及肝素化生理鹽水灌注。術(shù)后獲取各

6、組兔前列腺標(biāo)本,進(jìn)行大體、光鏡和透射式電鏡檢查。
　　 4.凋亡前列腺標(biāo)本作TUNEL染色,并從陽(yáng)性細(xì)胞密度高的腺體開(kāi)始計(jì)數(shù),分別選取10個(gè)腺體,記錄每個(gè)腺體的總細(xì)胞數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)。統(tǒng)計(jì)各組前列腺細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)以考察其對(duì)前列腺細(xì)胞凋亡表達(dá)水平的影響。
　　 第二部分
　　 1.動(dòng)物分組
　　 15只健康成年雄性雜種犬,犬齡3年以上,體重15kg以上,隨機(jī)分為單純超聲組(3只)、微泡假照組(3只)、超

7、聲微泡組(9只)。
　　 2.超聲空化治療過(guò)程
　　 用3％戊巴比妥鈉腹腔注射將犬麻醉,劑量1ml/kg,建立靜脈通道,下腹部剖腹探查,充分暴露前列腺;靜脈緩慢推注微泡混懸液,劑量0.1ml/kg,同時(shí)脈沖式聚焦超聲直接照射前列腺10min。治療結(jié)束后手術(shù)獲取前列腺。對(duì)照組處理同第一部分。
　　 3.病理觀察
　　 ①大體觀察:對(duì)前列腺大體標(biāo)本進(jìn)行連續(xù)大體切片,厚度4mm,肉眼描述外觀和剖面。
　　

8、 ②光鏡檢查:獲取的犬前列腺組織,在福爾馬林液固定24小時(shí)后,進(jìn)行常規(guī)病理切片,HE染色,光鏡下觀察組織病理學(xué)改變。
　　 ③電鏡檢查:各組實(shí)驗(yàn)所取前列腺損傷區(qū)組織修切成大小約1mm3的小塊,標(biāo)本在2.5％戊二醛溶液中固定后,以1％四氧化鋨后固定,制成超薄切片,用透射電鏡觀察前列腺組織中微血管壁的超微結(jié)構(gòu)改變。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分
　　 1.前列腺微血管通透性實(shí)驗(yàn):
　　 全波長(zhǎng)掃描,

9、發(fā)現(xiàn)EB溶液在625nm波長(zhǎng)處具有最大吸收峰,根據(jù)梯度濃度EB溶液在625nm測(cè)得的光密度值(OD),得出回歸方程y=12.569X+0.120(y為EB濃度,X為OD值,F=3795.2,決定系數(shù)R2=0.998,P＜0.001)。各組測(cè)得OD值代入回歸方程,求得US+MB組前列腺EB平均濃度23.6±2.9μg/g、US組為6.74±0.3μg/g、MB組6.2±0.3μg/g,US+MB組EB濃度明顯高于其余兩組,差異顯著(P＜0

10、.01)。
　　 2.病理觀察實(shí)驗(yàn):
　　 (1)大體和光鏡檢查結(jié)果
　　 大體觀察,US+MB組前列腺顯著藍(lán)染,而單純US和MB組藍(lán)染不明顯。光鏡觀察,US和MB兩對(duì)照組可見(jiàn)前列腺腺上皮細(xì)胞呈立方形,細(xì)胞排列緊密,細(xì)胞核位于基底部,腺腔內(nèi)未見(jiàn)特殊異常病理表現(xiàn)。US+MB組可見(jiàn)部分腺體擴(kuò)張,腺體上皮細(xì)胞排列較紊亂,細(xì)胞間結(jié)構(gòu)較松散,腺腔內(nèi)可見(jiàn)大量嗜伊紅染的液體。
　　 (2)電鏡檢查結(jié)果:
　　

11、US、MB組前列腺組織可見(jiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊,部分線粒體腫脹,細(xì)胞間的緊密連接形態(tài)正常;US+MB組可見(jiàn)部分細(xì)胞器崩解、破壞,一側(cè)血管壁不完整,前列腺細(xì)胞間隙可見(jiàn)漏出之紅細(xì)胞。
　　 (3)TUNEL檢查結(jié)果:
　　 MB組及US組前列腺組織內(nèi)僅見(jiàn)稀少黃褐色陽(yáng)性細(xì)胞,US+MB組陽(yáng)性細(xì)胞光鏡下呈分布密集;各組AI值統(tǒng)計(jì),MB組為3.92±6.04％、US組為8.18±4.29％、US+MB組為23.31±3.64％,U

12、S+MB組與其余各組間AI值兩兩比較,P均＜0.01,說(shuō)明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,即US+MB組AI明顯高于其余各組,而US組與MB組AI均值未見(jiàn)顯著差異。
　　 第二部分
　　 1.大體觀察:單純超聲和微泡假照兩對(duì)照組前列腺外觀和切面均色澤正常,僅見(jiàn)到包膜血管手術(shù)撕裂出血點(diǎn),未見(jiàn)血腫形成;超聲微泡組可見(jiàn)輻照區(qū)前列腺表面及內(nèi)部腺體層內(nèi)均出現(xiàn)大片斑片狀或條索狀黑色出血帶和血腫,邊界可清晰或者不清晰。
　　 2.光鏡檢查

13、:單純超聲和微泡假照兩對(duì)照組可見(jiàn)前列腺腺上皮呈低柱狀或立方形,細(xì)胞排列緊密,間質(zhì)及結(jié)締組織內(nèi)未見(jiàn)明顯紅細(xì)胞漏出。超聲微泡組可見(jiàn)部分腺體擴(kuò)張,腺體上皮細(xì)胞排列紊亂結(jié)構(gòu)松散,血管壁破裂不完整,間質(zhì)內(nèi)有大量紅細(xì)胞漏出,血腫形成。
　　 3.電鏡檢查:單純微泡組及微泡假照組的前列腺組織在透射電鏡下可觀察到微血管內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊,腺體細(xì)胞間緊密連接形態(tài)正常。超聲微泡組則見(jiàn)細(xì)胞間橋連接斷裂、紅細(xì)胞大量漏出。
　　 結(jié)論: