胃癌中ERCCI、DNA-PKcs蛋白的表達.pdf

1、胃癌是我國常見的消化系腫瘤，嚴重威脅人類健康。就發(fā)病率和死亡率而言，胃癌在我國居惡性腫瘤第二位。胃癌的發(fā)生是多因素、多基因參與的復(fù)雜過程，內(nèi)外環(huán)境致癌物所導致的DNA損傷得不到有效修復(fù)而引起基因突變的累積是胃癌發(fā)病的重要原因之一，DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)在修復(fù)基因、維持基因組穩(wěn)定性及拮抗癌變中起著重要作用。已有的研究結(jié)果顯示：ERCCI(修復(fù)交叉互補基因Ⅰ，excision repair cross—complementing geneⅠ)、

2、DNA-PKcs(DNA依賴性蛋白激酶，DNA dependent protein kinase catalytic subunit)是重要的DNA損傷修復(fù)因子，在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中起著重要作用。本研究的目的是通過組織芯片技術(shù)探討DNA修復(fù)因子ERCCI，DNA-PKcs蛋白在胃癌中表達的臨床意義。 材料與方法: 收集中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院及2007年2月～2008年2月手術(shù)切除的胃癌標本(術(shù)前未行化療)124例，年齡2

3、9～85歲，中位年齡60.1歲，病理均為腺癌，按分化程度：高分化85例，中分化34例，低分化5例；TNM分期，具體分為：Ⅰ期17例，Ⅱ期46例，Ⅲ期61例，另24例距胃癌組織5厘米以遠的正常胃組織作為對照。采用免疫組織化學法(SP法)檢測上述胃癌及癌旁正常組織中ERCC1、DNA-PKcs蛋白的表達。濃縮型鼠抗人ERCCI，DNA-PKcs單克隆抗體均購自美國Neomarkers公司，工作濃度為1:100；SP試劑盒和DAB顯色試劑盒購

4、自福州邁新生物技術(shù)公司；組織芯片經(jīng)微波抗原修復(fù)后，按SP免疫組化試劑盒說明書進行染色。已知陽性切片在同一條件下染色作為陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。 結(jié)果判定: ERCCI、DNA-PKcs以胞核中出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒定為陽性染色。每個組織點隨機選取5個高倍視野(×400)，計數(shù)100個腫瘤細胞中的陽性細胞數(shù)。不著色或陽性細胞數(shù)<10％定為陰性，陽性細胞數(shù)≥10％既定為陽性[1]，每例均取兩點的平均值。 統(tǒng)

5、計分析方法： 以SPSS V13.0軟件包進行統(tǒng)計分析，采用四格表X2檢驗、SPearman秩相關(guān)檢驗和Fisher精確計算概率法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 實驗結(jié)果: 一、ERCCI、DNA-PKcs在胃癌及癌旁組織中的表達 ERCCI在124例胃癌組織中的陽性表達率為80.6％(100/124)、為高表達；在癌旁組織中表達率為66.7％(16/24)。ERCCI在胃癌組織和癌旁組織的表達無

6、統(tǒng)計學差異(X2=0.699，P=0.403)。DNA-PKcs在124例胃癌組織中的陽性表達率67.7％，(84/124)，在癌旁組織中表達率為33.3％(8/24)，DNA-PKcs在胃癌組織和癌旁組織的表達無統(tǒng)計學差異(X2=3.026，P=0.082)。 二、ERCCI、DNA-PKcs表達與分化程度及臨床分期 ERCCI的表達與胃癌分化程度無關(guān)(X2=4.073，P=0.667)，與臨床分期有關(guān)(X2=13.

7、081，P=0.042)。DNA-PKcs的表達與胃癌分化程度無關(guān)(X2=2.477，P=0.871)，與臨床分期無關(guān)(X2=4.466，P=0.614)。 三、ERCCI、DNA-PKcs表達的相關(guān)性 ERCCI、DNA-PKcs表達之間無相關(guān)性(t=4.287，P=0.038<0.05)。 討論: DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)在修復(fù)基因、維持基因組穩(wěn)定性及拮抗癌變中起著重要作用。已有的研究結(jié)果顯示：ERCCI、

8、DNA-PKcs是重要的DNA損傷修復(fù)因子，在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中起著重要作用。環(huán)境因素和遺傳因素均可導致體細胞DNA受損。ERCCI主要參與核苷酸切除修復(fù)(NER)，本研究結(jié)果顯示胃癌組織ERCCI陽性表達主要位于細胞核，胃癌組織中的陽性表達率為80.6％，高于鄰近癌旁正常胃組織(66.7％)，但無顯著統(tǒng)計學差異((X2=0.699，P=0.403))。ERCCI在肺癌組織中的表達陽性率顯著低于癌旁組織(P<0.05)，這表明癌癥的發(fā)生與

9、ERCCI基因表達低下存在一定的關(guān)聯(lián)。而在本研究ERCCI表達與腫瘤分化程度無關(guān)(X2=4.073，P=0.667)，與臨床分期有關(guān)(X2=13.081，P=0.042)，臨床分期越晚，ERCCI表達的陽性率越低，表明ERCCI低表達與腫有瘤的惡化程度有關(guān)。在其他研究中，ERCCI表達與食管賁門癌組織分化程度呈正相關(guān)，也有研究表明ERCCI的表達與肺癌分化程度、T分期和臨床分期呈負相關(guān)。綜上所述，ERCCI可考慮作為胃癌的臨床分期診斷的

10、一個指標。 DNA依賴性蛋白激酶(DNA dependent protein kinase catalytic subunit，DNA-PKcs)是唯一由DNA末端激活的真核細胞激酶，具有絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶活性，可磷酸化多種底物蛋白，在細胞周期、細胞信號轉(zhuǎn)導通路、凋亡和轉(zhuǎn)錄調(diào)控等細胞學中發(fā)揮著重要功能。本實驗中DNA-PKcs在胃癌組織中的陽性表達率為69.4％，為高表達，與癌旁組織中的表達相近(P>0.05)，但無統(tǒng)計學的

11、差異。有研究表明DNA-PKcs在肺癌組織中的表達明顯高于癌旁正常肺組織，也有報道在人類結(jié)腸癌中DNA-PKcs的表達水平低或不表達。DNA-PKcs在胃癌組織中的與組織分化程度及臨床分期均無關(guān)。DNA-PKcs的表達與肺癌分化程度和臨床分期不相關(guān)。DNA-PKcs過度表達與星形細胞瘤分化和預(yù)后密切相關(guān)，能夠客觀的反映腫瘤增生分化和惡性程度，可以作為判斷星形細胞瘤分化和預(yù)后有價的參考指標。以上說明DNA-PKcs可以考慮作為癌癥檢測的一

12、個指標，但不能反應(yīng)腫瘤的發(fā)展程度。 本實驗中ERCCI、DNA-PKcs均為高表達，但是2者未表現(xiàn)出相關(guān)性，目前關(guān)于ERCCI、DNA-PKcs的兩者的相關(guān)性研究較少，需要進一步的探索研究。 結(jié)論: 1、本實驗中ERCCI、DNA-PKcs在胃癌均為高表達，但是兩者在胃癌組織和癌旁組織的表達無統(tǒng)計學差異。 2、ERCCI的表達與胃癌分化程度無關(guān)、與臨床分期有關(guān)(X2=13.081，P=0.042)。DNA