非小細胞肺癌中ERCC1、DNA-PKcs的表達與預后的關系.pdf

1、肺癌的發(fā)生是多因素、多基因參與的復雜過程，內外環(huán)境致癌物所導致的DNA損傷得不到有效修復而引起基因突變的累積是肺癌發(fā)病的重要原因之一；肺癌放化療抵抗是肺癌術后預后不良的重要影響因素。DNA損傷修復系統(tǒng)在修復基因、維持基因組穩(wěn)定性及拮抗癌變中起著重要作用。DNA修復因子的低表達或突變往往伴隨著基因不穩(wěn)定性增加，甚至是腫瘤惡性表型的產生，DNA修復因子的過表達可降低放化療的敏感性。 切除修復交叉互補基因1(Exsicion repa

2、ir cross-complement group 1，ERCC1)、DNA依賴性蛋白激酶催化亞單位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit，DNA-PKcs)作為重要的DNA修復因子，可以修復DNA鏈內交聯(lián)及DNA雙鏈斷裂損傷，與卵巢癌、食管癌及胃癌等的發(fā)病有關，而且均與肺癌主要化療藥順鉑的耐藥及腫瘤的放療敏感性降低有關，二者共同在肺癌中的表達情況及作用機制的研究國內外均未見報道。

3、 本研究擬采取組織芯片技術及免疫組化SP法檢測ERCC1、DNA-PKcs在非小細胞肺癌中的表達，探討二者在肺癌發(fā)生發(fā)展及預后中的作用，以期為肺癌的個體化治療、預后判定提供有價值的分子檢測指標。 材料和方法： 1、病例和標本 收集中國醫(yī)科大學附屬一院1997年2月-2000年9月間手術切除并經病理確診的非小細胞肺癌石蠟標本116例，男性85例，女性31例，中位年齡為57.5歲；所有病例術前均未接受過放化療

4、及免疫治療，隨訪時間截至2005年9月；取其中12例癌旁正常肺組織作為對照。 2、試劑 濃縮型鼠抗人ERCC1、DNA-PKcs單克隆抗體均購自美國Neomarkers公司，工作濃度為1:100;SP檢測試劑盒和DAB顯色液均購自福州邁新生物技術有限公司。 3、方法 應用組織芯片技術和免疫組化SP法檢測肺癌組織及癌旁正常肺組織中ERCC1和DNA-PKcs的表達。組織芯片由上海芯超生物科技有限公司制作：染

5、色方法按SP免疫組化試劑盒說明書進行，ERCC1和DNA-PKcs經檸檬酸(PH=6.0)微波抗原修復。 4、結果判定 ERCCl、DNA-PKcs以胞核中出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒定為陽性染色。每個組織點隨機選取5個高倍視野(×400)，計數(shù)100個腫瘤細胞中的陽性細胞數(shù)。不著色或陽性細胞數(shù)≤10％定為陰性，陽性細胞數(shù)>10％定為陽性，每例均取兩點的平均值。 5、統(tǒng)計分析方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行

6、數(shù)據(jù)分析處理，各組間率的比較采用卡方檢驗。生存數(shù)據(jù)分析采用Kaplan-Meier法，采用雙側檢驗，P<0.05為具有統(tǒng)計學意義。 實驗結果： 1、ERCC1、DNA-PKcs在NSCLC及正常肺癌組織中的表達 ERCC1、DNA-PKcs在116例NSCLC組織中的陽性表達率分別為40.5％、75.0％，ERCCl在肺癌組織和癌旁正常組織的表達無統(tǒng)計學差異(P=0.129)，而DNA-PKcs在癌組織中的表達明

7、顯高于癌旁正常肺組織(P=0.000)。 2、ERCC1、DNA-PKcs表達與患者一般狀況及臨床病理特征的關系 ERCC1的表達與肺癌分化程度、T分期和臨床分期呈負相關(P<0.05)，但與患者的性別、年齡、病理類型、淋巴結轉移等無關(P>0.05)。DNA-PKcs的表達與臨床病理特征均無關。 3、ERCC1、DNA-PKcs表達的相關性 ERCC1、DNA-PKcs表達之間存在正相關(r=0.274

8、，P=0.003)。 4、ERCC1、DNA-PKcs表達與預后的關系 預后較好的患者ERCC1的表達水平有高于預后較差者的趨勢，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.014)。DNA-PKcs的表達與預后無關(P>0.05)多因素分析示ERCC1、DNA-PKcs不是影響預后的獨立危險因素。 結論： 1、分化程度高、腫瘤小和生存期長者，ERCC1相對高表達，所以ERCC1的檢測對預后評估有一定的指導價值；