DNA-PKCs與骨肉瘤化療耐藥的相關性研究.pdf

1、目的：
　　 研究人骨肉瘤U-2 OS細胞系化療與DNA-PKCs表達的相關關系，監(jiān)測人骨肉瘤U-2OS細胞應用化療藥物順鉑（DDP）、DNA-PKCs抑制劑wortma-nnin及兩者合用后細胞活性的變化及DNA-PKCs的表達差異，探討DNA-PKCs抑制劑wortmannin在人骨肉瘤化療中的意義，以及應用DNA-PKCs抑制劑如wortmannin處理人骨肉瘤U-2 OS細胞對化療藥物敏感性的影響。
　　 方法：

2、
　　 采用噻唑鹽比色法（MTT）檢測并比較人骨肉瘤U-2 OS細胞株對順鉑（DDP）、DNA-PKCs抑制劑wortmannin及兩者合用的藥物敏感性，利用倒置顯微鏡觀察用藥干預前后細胞一般大體形態(tài)改變；利用蛋白印跡（Westernblot）技術檢測DNA-PKCs蛋白在人骨肉瘤U-2 OS細胞應用化療藥物順鉑（DDP）、DDP+wortmannin分別培養(yǎng)細胞48小時后細胞中的表達。
　　 結果：
　　 本實

3、驗MTT法檢測細胞活性，以不同濃度梯度的DDP、Wortmannin及DDP+Wortmannin（兩藥物濃度梯度同前不變）三組分別干預人骨肉瘤U-2 OS細胞株48 h后，每組該細胞的增殖受抑，呈劑量依賴性，隨藥物濃度的增大，OD值明顯減少，且與對照組相比存在顯著性差異（P<0.05），其三組間細胞的增殖受抑程度DDP+Wortmannin>DDP>Wortmannin，順鉑和Wortmannin兩者合用誘導人骨肉瘤U-2 OS細胞凋

4、亡而抑制了腫瘤的增殖較其它兩組顯著，DDP、Wortmannin分別與DDP+Wortmannin進行組間比較，兩樣本t檢驗均（P<0.05）。根據(jù)前一步的細胞活性檢測結果，選用適當濃度DDP、DDP+Wortmannin兩組分別處理人骨肉瘤U2-OS細胞48小時后，利用蛋白印跡（Western blot）技術檢測DNA-PKCs蛋白表達，結果兩組細胞內DNA-PKcs蛋白的表達均下調，尤以后者顯著，且與對照組兩兩組間比較t檢驗（P<0

5、.01）。
　　 結論：
　　 1本試驗表明DNA-PKCs抑制劑Wortmannin可以增強順鉑殺傷骨肉瘤細胞的作用，促進順鉑誘導骨肉瘤細胞凋亡，Wortmannin在人骨肉瘤U2-OS細胞對順鉑化療過程中起到了增敏作用。
　　 2在分子水平進一步探討人骨肉瘤U-2 OS細胞對順鉑化療耐藥機制，提示骨肉瘤細胞對化療藥物耐藥與DNA-PKcs的高表達有關，驗證了DNA-PKCs的表達可能與骨肉瘤的預后相關的觀點。