人骨肉瘤細(xì)胞阿霉素耐藥株MG63-ADR的建立及采用基因芯片技術(shù)對骨肉瘤耐藥相關(guān)基因的初步研究.pdf

1、本文分兩部分，第一部分：人骨肉瘤細(xì)胞阿霉素耐藥株MG63/ADR的建立及其生物學(xué)特性。
　　 目的：建立骨肉瘤多藥耐藥株體外模型，探討逆轉(zhuǎn)骨肉瘤MDR的方法。
　　 方法：采用阿霉素濃度遞增培養(yǎng)法，建立人骨肉瘤MG63的多藥耐藥細(xì)胞株MG63/ADR。MTT法觀察細(xì)胞的生長規(guī)律和多藥耐藥性，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布，Western blot、RT-PCR分別檢測耐藥相關(guān)基因（mdr、bcl-2、cyclinDl、sur

2、vivin）表達(dá)及蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：與MG63細(xì)胞比較，MG63/ADR細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞減少10.61％，S期細(xì)胞增加15.06％。該細(xì)胞株對多種抗腫瘤藥物耐藥，MG63/ADR對阿霉素的耐藥指數(shù)是親本細(xì)胞的9.09倍，對順鉑（DDP）、甲氨蝶呤（MTX）、表阿霉素（EPB）、長春新堿（VCR）四種藥物耐藥指數(shù)均顯著增加。耐藥相關(guān)基因mdr、bcl-2、cyclinD1的表達(dá)顯著增加，survivin基因表達(dá)有一

3、定增加，上述四種耐藥相關(guān)基因蛋白表達(dá)均明顯增加。
　　 結(jié)論：建立的骨肉瘤MG63/ADR細(xì)胞具有多藥耐藥特性，其耐藥性與mdr、bcl-2、cyclinDl、survivin等基因的過表達(dá)有關(guān)。
　　 第二部分：illumina基因芯片對骨肉瘤耐藥相關(guān)基因的研究。
　　 目的：運(yùn)用基因芯片技術(shù)研究骨肉瘤耐藥基因表達(dá)譜特征，探討耐藥相關(guān)基因。
　　 方法：提取人骨肉瘤MG63細(xì)胞及其耐藥細(xì)胞MG63/AD

4、R兩個(gè)樣本中總RNA，Illumina寡核苷酸基芯片分析每個(gè)樣本的48000個(gè)基因變化。
　　 結(jié)果：MG63/ADR樣本與MG63樣本相比，共有2550個(gè)基因調(diào)節(jié)變化顯著，其中上調(diào)1194個(gè)基因；下調(diào)1356個(gè)基因。分子及生物功能分析顯示上凋表達(dá)的基因涉及傳遞蛋白、蛋白翻譯合成、代謝、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、趨化因子、細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)等種類。與腫瘤耐藥密切相關(guān)的細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)142個(gè)基因，其中上調(diào)77個(gè)基因，下調(diào)65個(gè)基因。