非鮑曼的不動(dòng)桿菌的基因型鑒定與對(duì)_-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討鑒定不動(dòng)桿菌各基因型，包括醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌復(fù)合體的有效方法；分析臨床分離的非鮑曼的不動(dòng)桿菌的臨床分布特征及藥敏情況；檢測(cè)非鮑曼的不動(dòng)桿菌的金屬β-內(nèi)酰胺酶和整合酶基因，探討其在介導(dǎo)非鮑曼的不動(dòng)桿菌對(duì)?-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥中的作用，最終為臨床抗菌藥物治療提供合理的指導(dǎo)和參考。
　　方法：⑴收集蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院自2012年2月至2013年4月無重復(fù)分離的非鮑曼的不動(dòng)桿菌的40株，醋酸鈣-鮑

2、曼不動(dòng)桿菌復(fù)合體20株。運(yùn)用全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng) VITEK2試卡法對(duì)臨床分離的不動(dòng)桿菌進(jìn)行菌種鑒定，并對(duì)20株醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌復(fù)合體進(jìn)一步分析經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增鮑曼不動(dòng)桿菌特異表達(dá)的D類碳青霉烯酶基因OXA-51、16S rRNA基因及醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌復(fù)合體各菌種特異表達(dá)的gyrB基因，以確證其準(zhǔn)確種屬。⑵用K-B法對(duì)臨床收集的非鮑曼的不動(dòng)桿菌進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，分析非鮑曼的不動(dòng)桿菌的臨床分布特征及藥物敏感情

3、況。⑶用PCR擴(kuò)增?-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥基因，如：金屬β-內(nèi)酰胺酶（SIM-1、VIM-2、IMP-4）、Ⅰ-Ⅲ類整合子的整合酶基因。
　　結(jié)果：①不動(dòng)桿菌屬菌種鑒定結(jié)果：60株不動(dòng)桿菌經(jīng)VITEK2全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)鑒定為醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌復(fù)合體20株，洛菲不動(dòng)桿菌29株，瓊氏不動(dòng)桿菌9株，溶血不動(dòng)桿菌2株。20醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌復(fù)合體經(jīng)PCR擴(kuò)增16S rRNA序列分析結(jié)果示：鮑曼不動(dòng)桿菌16株，醋酸鈣不動(dòng)桿菌3

4、株，及1株不明確基因型不動(dòng)桿菌；20醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌復(fù)合體經(jīng)PCR擴(kuò)增gyrB基因結(jié)果分析為鮑曼不動(dòng)桿菌16株，醋酸鈣不動(dòng)桿菌3株，不動(dòng)桿菌基因型13TU1株；OXA-51陽性率80％。②非鮑曼的不動(dòng)桿菌臨床分布特征：44株非鮑曼的不動(dòng)桿菌（4洛菲不動(dòng)桿菌29株，瓊氏不動(dòng)桿菌9株，溶血不動(dòng)桿菌2株及自20醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌復(fù)合體分離出的3株醋酸鈣不動(dòng)桿菌，1株不動(dòng)桿菌基因型13TU）科室分布主要來源于心內(nèi)科、呼吸內(nèi)科、ICU。感染

5、發(fā)生的主要部位是呼吸道，構(gòu)成比為65.9%；且非鮑曼不動(dòng)桿菌中以洛菲不動(dòng)桿菌為主，構(gòu)成比占非鮑曼的不動(dòng)桿菌的61.4%。③藥敏結(jié)果：44株非鮑曼的不動(dòng)桿菌中3株為多耐藥菌株（2株洛菲不動(dòng)桿菌及1株溶血不動(dòng)桿菌，且均對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥），17株為僅β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥，余24株為完全敏感菌株。④非鮑曼的不動(dòng)桿菌金屬β-內(nèi)酰胺酶基因檢測(cè)結(jié)果：44株非鮑曼的不動(dòng)桿菌中，金屬β-內(nèi)酰胺酶SIM-1陽性率20.5%（9/44），陽性菌株為

6、2株多藥耐藥洛菲不動(dòng)桿菌及7株（5株洛菲不動(dòng)桿菌、2株瓊氏不動(dòng)桿菌）對(duì)?-內(nèi)酰胺類抗菌藥物不同程度耐藥菌株；VIM-2陽性率9.1%（4/44），多藥耐藥菌株中的1株洛菲不動(dòng)桿菌、1株溶血不動(dòng)桿菌及對(duì)?-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥1株洛菲不動(dòng)桿菌及1株瓊氏不動(dòng)桿菌攜帶VIM-2基因；IMP-4未檢測(cè)出。⑤非鮑曼的不動(dòng)桿菌整合酶基因檢測(cè)結(jié)果：IntI-1陽性率11.4%(5/44)，3株多藥耐藥菌株及對(duì)?-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥菌株中的1株洛菲不

7、動(dòng)桿菌、1株瓊氏不動(dòng)桿菌IntI-1陽性表達(dá)； IntI-2陽性率13.6%(6/44)，陽性菌株均為對(duì)?-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥菌株，3株為洛菲不動(dòng)桿菌、1株為溶血不動(dòng)桿菌及2株為瓊氏不動(dòng)桿菌；IntI-3未檢測(cè)出。
　　結(jié)論：⑴全自動(dòng)菌種鑒定系統(tǒng)輔以分子生物學(xué)基因分型方法，如分析鮑曼不動(dòng)桿菌標(biāo)志性基因OXA-51、16S rRNA序列、不動(dòng)桿菌屬種特異性的DNA回旋酶B亞基（GyrB）基因gyrB，可較為準(zhǔn)確地鑒定醋酸鈣-鮑曼不

8、動(dòng)桿菌復(fù)合體各個(gè)菌種，且gyrB基因在用于親緣性相近菌種的鑒定與區(qū)分方面優(yōu)于16S rRNA基因。⑵臨床分離的非鮑曼的不動(dòng)桿菌以心內(nèi)科、呼吸內(nèi)科、重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)分離率較高，呼吸系統(tǒng)感染較為常見。且以洛菲不動(dòng)桿菌為首位，值得進(jìn)一步關(guān)注。⑶非鮑曼的不動(dòng)桿菌的耐藥率相對(duì)較低，對(duì)臨床床用抗菌藥物仍較為敏感，但已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多耐藥菌株，需要進(jìn)一步關(guān)注。⑷本地非鮑曼的不動(dòng)桿菌檢測(cè)出的金屬β-內(nèi)酰胺酶主要包括：金屬β-內(nèi)酰胺酶SIM-1、VIM-2

9、，金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥率達(dá)100%，推測(cè)金屬β-內(nèi)酰胺酶在非鮑曼的不動(dòng)桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機(jī)制中起一定作用，但存在耐藥菌株金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性的情況，提示存在其他耐藥機(jī)制共同參與非鮑曼的不動(dòng)桿菌的耐藥。首次發(fā)現(xiàn)表達(dá)SIM-1、VIM-2的洛菲不動(dòng)桿菌、溶血不動(dòng)桿菌、瓊氏不動(dòng)桿菌。而檢測(cè)出的整合子包括Ⅰ、Ⅱ類整合子，整合子陽性菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥率達(dá)100%，推測(cè)Ⅰ、Ⅱ類整合子在介導(dǎo)非鮑曼的不動(dòng)