高糖誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞非磷酸化β-catenin表達(dá)及蟲草菌液對(duì)其作用.pdf

1、研究背景及目的:
　　糖尿病腎病(DN)是終末期腎病的主要原因之一，其腎間質(zhì)病變與遠(yuǎn)期預(yù)后密切相關(guān)。研究表明腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT)參與腎間質(zhì)纖維化進(jìn)展。
　　β-catenin是一種多功能蛋白質(zhì)，除了與E鈣粘蛋白(E-cad)連接介導(dǎo)細(xì)胞粘附外，還參與了多條EMT通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，該功能與其代謝過程有關(guān):β-catenin在胞質(zhì)中與多種蛋白共同組成Axin復(fù)合物，隨后被CK1、GSK3磷酸化，進(jìn)而被泛素-蛋白酶系統(tǒng)降解

2、。β-catenin磷酸化與否決定了其是否被降解，非磷酸化β-catenin是其活化形式，不能被泛素-蛋白酶降解系統(tǒng)識(shí)別，因而在胞質(zhì)內(nèi)累積并轉(zhuǎn)移入核，與核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，激活靶基因轉(zhuǎn)錄。研究表明β-catenin信號(hào)在糖尿病腎病EMT中是活化的，但既往研究多通過觀察β-catenin表達(dá)部位變化或蛋白總含量及胞核含量變化反映其是否活化，而直接對(duì)非磷酸化β-catenin（活化形式）研究較少，在糖尿病腎病中也未見報(bào)道。

3、>　　冬蟲夏草是我國(guó)名貴中藥材，廣泛用于腎臟疾病的治療，對(duì)糖尿病腎病有一定療效。近期研究表明其腎保護(hù)作用涉及抑制EMT，能改善高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞自身表型丟失、間質(zhì)細(xì)胞表型增加，降低尿蛋白排泄、減少腎間質(zhì)膠原沉積及減輕腎損傷，但具體機(jī)制尚不清楚。
　　本實(shí)驗(yàn)將觀察高糖環(huán)境下人近端腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）非磷酸化β-catenin表達(dá)，探討β-catenin活化與EMT的關(guān)系。同時(shí)采用蟲草菌液進(jìn)行干預(yù)，觀察其對(duì)上述過程的影響，

4、探索其腎保護(hù)作用的可能新機(jī)制。
　　方法:
　　應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，分下列六組培養(yǎng)HK-2細(xì)胞:正常對(duì)照組(5.5mM葡萄糖DMEM/F12培養(yǎng)液)，高糖組（30 mM葡萄糖DMEM/F12培養(yǎng)液），甘露醇組（5.5mM葡萄糖DMEM/F12培養(yǎng)液+甘露醇24.5 mM），高糖+5μg/mL蟲草菌液干預(yù)組（HG+C5組，5.5mM葡萄糖DMEM/F12培養(yǎng)液+5μg/mL蟲草菌液），高糖+10μg/mL蟲草菌液干預(yù)組(HG+C

5、10組，5.5mM葡萄糖DMEM/F12培養(yǎng)液+10μg/mL蟲草菌液)，高糖+20μg/mL蟲草菌液干預(yù)組（HG+C20組，5.5mM葡萄糖DMEM/F12培養(yǎng)液+20μg/mL蟲草菌液）。培養(yǎng)48h后收集各組細(xì)胞，Western Blot檢測(cè)E-cad、α-SMA、非磷酸化β-catenin的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　高糖組與正常組及甘露醇組比較，E-cad表達(dá)減少(P＜0.01)，α-SMA表達(dá)增加(P＜0.01)，

6、同時(shí)非磷酸化β-catenin表達(dá)增加(P＜0.01)。蟲草菌液干預(yù)后，與高糖組比較，HG+C5組E-cad表達(dá)無明顯變化(P＞0.05)，HG+C10、HG+C20組E-cad表達(dá)上調(diào)(P＜0.01)，蟲草菌液干預(yù)的三組α-SMA表達(dá)均下調(diào)(P＜0.01);蟲草菌液干預(yù)的三組非磷酸化β-catenin表達(dá)較高糖組均下調(diào)(P＜0.01)，且隨蟲草菌液濃度增大其下調(diào)幅度增大(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、高糖環(huán)境下HK