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文檔簡介
1、目的:
觀察高葡萄糖刺激下人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)中PKCδ和p66Shc的mRNA表達(dá)及蛋白磷酸化水平。研究PKCδ對高葡萄糖刺激下HK-2細(xì)胞p66Shc磷酸化及線粒體轉(zhuǎn)位的影響。
方法:
1、以HK-2細(xì)胞作為體外觀察的細(xì)胞,采用不同濃度和同一濃度不同時間葡萄糖刺激HK-2細(xì)胞,分別用Real Time PCR和Western Blot技術(shù),檢測PKCδ和p66shc基因及蛋白磷酸化水平。
2、 2、①用PKCδ抑制劑對HK-2細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),用或不用高葡萄糖處理后,采用Western blot和細(xì)胞免疫熒光技術(shù)分析p66Shc蛋白磷酸化水平;②經(jīng)上述方法處理細(xì)胞后,分別提取細(xì)胞漿與線粒體蛋白,用Western blot觀察磷酸化p66Shc蛋白線粒體轉(zhuǎn)位情況。
結(jié)果:
1、高葡萄糖刺激下PKCδ和p66Shc的mRNA表達(dá)及蛋白磷酸化水平較對照組明顯增加(P<0.05),且呈劑量和時間依賴。
2
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