茶多糖對高糖誘導(dǎo)的HK-2細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用及TGF-β1、α-SMA表達影響的研究.pdf

1、目的：研究茶葉提取物茶多糖（TPS）對高糖誘導(dǎo)的人腎小管上皮細胞（HK-2）的氧化應(yīng)激損傷的保護作用及其機制，探討茶多糖對高糖誘導(dǎo)的HK-2細胞轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達的影響。為闡釋茶多糖對糖尿病腎病的治療作用及其機制，提供實驗性理論依據(jù)。
　　方法：(1)綠茶植物基源鑒定。(2)茶葉提取物茶多糖的制備：經(jīng)水提醇沉法提取得到茶多糖，初步純化后采用苯酚-硫酸法檢測茶多糖含量。(3)高糖誘

2、導(dǎo)HK-2細胞，在體外建立模擬高血糖所致糖尿病腎臟組織的氧化應(yīng)激損傷模型，分為正常組（NC）、高糖組（HG）、茶多糖低（200μg/mL）、中（400μg/mL）、高（600μg/mL）劑量組，刺激時間為48h。(4)四甲基偶氮唑鹽微量比色法（MTT）檢測茶多糖對HK-2細胞增殖的影響。(5)DCFH-DA法檢測茶多糖對高糖刺激的HK-2細胞內(nèi)ROS水平的影響。(6)Western-blot檢測核因子NF-E2相關(guān)因子(Nrf2)、血紅

3、素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化物還原酶1(NQO1)、TGF-β1、α-SMA蛋白水平的表達。(7)RT-PCR檢測TGF-β1、α-SMA mRNA水平的表達。
　　結(jié)果：(1)與正常組相比，高糖刺激組的ROS水平明顯升高，在給予茶多糖干預(yù)后，高糖刺激組ROS水平下降，且與TPS濃度呈劑量依賴性。(2)MTT實驗結(jié)果表明TPS對HK-2細胞的增殖影響較小。(3)Western-blot檢測結(jié)果顯示：與正常組比較，

4、高糖組Nrf2、HO-1、NQO1表達均升高，在給予TPS干預(yù)后，與正常組和高糖組比較Nrf2、HO-1、NQO1表達均升高；與正常組比較，高糖組TGF-β1、α-SMA水平均顯著升高，在給予TPS干預(yù)后，與高糖組比較TGF-β1、α-SMA水平均下降。(4)RT-PCR檢測結(jié)果顯示：與正常組比較，高糖組TGF-β1、α-SMA mRNA水平均顯著升高，在給予茶多糖干預(yù)后，與高糖組比較TGF-β1、α-SMA mRNA水平均顯著下降。<