白血病耐藥相關(guān)膜蛋白SFPQ的發(fā)現(xiàn)及其耐藥機制的研究.pdf

1、目前化學(xué)治療仍是臨床治療白血病的主要手段，也是造血干細胞移植的基礎(chǔ)。近年來盡管有多種新的藥物和治療方案推出，但大多數(shù)急性白血病患者最終因治療失敗而死亡。腫瘤細胞對抗癌藥物產(chǎn)生抗藥性是化療失敗的一個主要原因。導(dǎo)致治療失敗的原因是多方面的，其中多藥耐藥性（multi-drug resistance，MDR）是最重要的一種。MDR又稱多藥抗藥性（pleiotropic durg resistnace），是指惡性腫瘤細胞對一種化療藥物產(chǎn)生耐藥現(xiàn)

2、象后，產(chǎn)生了對多種結(jié)構(gòu)不同、作用靶點和作用機制各異的其他抗癌藥物的抗藥性。
　　 白血病耐藥的產(chǎn)生是多因素的，隨誘導(dǎo)藥物、細胞種類、分化階段、及細胞所處微環(huán)境的不同而表現(xiàn)出不同的耐藥表型。雖然已有的研究揭示了一些腫瘤多藥耐藥的機制，但目前仍然不能完全解釋腫瘤多藥耐藥現(xiàn)象并有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的多藥耐藥。目前在白血病耐藥的臨床治療方面主要以抑制P-糖蛋白功能的耐藥逆轉(zhuǎn)劑為主，但其臨床效果也不理想，至今無一獲得FDA批準上市。雖然急性白

3、血病耐藥的發(fā)生機制已經(jīng)被廣泛的研究，但耐藥機制仍不明了，與白血病耐藥相關(guān)的細胞膜新靶點的篩選方法仍未得以建立。
　　 事實上白血病患者耐藥產(chǎn)生并非單一機制，此外，臨床上患者間的個體差異也為治療帶來了困難?？梢姲l(fā)現(xiàn)更多的白血病耐藥相關(guān)的治療靶點以實現(xiàn)多靶點聯(lián)合檢測與治療、豐富白血病耐藥機理從多角度全面闡明白血病耐藥機制以綜合制定白血病耐藥治療方案，建立治療和預(yù)后指標是解決上述問題的對策。細胞膜蛋白暴露于細胞外表面，特別容易被抗體等

4、試劑識別，作為靶點特異的檢測、診斷和治療的標志物；此外細胞膜蛋白還特別適于作為較為分散的血液腫瘤的治療靶點。鑒于此，本文著力于尋找新的白血病耐藥相關(guān)的細胞膜蛋白，考察其與白血病耐藥的相關(guān)性并探討其可能的機制。
　　 為尋找白血病耐藥相關(guān)的細胞膜靶點，本研究首先應(yīng)用消減免疫法，以人早幼粒細胞HL60活細胞作為耐受原誘導(dǎo)Balb/c小鼠免疫耐受，然后以阿霉素耐藥株HL60/ADR細胞作為免疫原免疫小鼠，得到能特異識別差異表達的耐藥株

5、與敏感株HL60細胞膜表面蛋白的雜交瘤細胞庫。通過對HL60和HL60/ADR兩種靶細胞的選擇性篩選和亞克隆培養(yǎng)、抗體的制備與純化等過程，我們最終獲得五株與兩種靶細胞結(jié)合能力不同的單克隆抗體，這些抗體攜帶特定的耐藥蛋白的標志信息。
　　 為了進一步獲得相應(yīng)抗原的信息，我們通過免疫沉淀和蛋白電泳技術(shù)分離敏感和耐藥的HL60差異表達的細胞膜蛋白，并通過MALDI-TOF-MS鑒定抗原。最終我們獲知單抗5D12的靶抗原為SFPQ，該蛋

6、白高表達于敏感的HL60細胞膜表面，在阿霉素耐藥株細胞膜其表達降低。通過siRNA干擾SFPQ，我們發(fā)現(xiàn)細胞膜高表達該蛋白的HL60細胞其膜SFPQ表達水平降低，由此確認SFPO確為單抗5D12的靶抗原。此結(jié)果系首次發(fā)現(xiàn)SFPQ可表達在腫瘤細胞膜表面。
　　 通過實驗我們發(fā)現(xiàn)5D12為有生物學(xué)活性的細胞膜蛋白SFPQ的特異性抗體。在以5D12作為研究SFPQ的功能的實驗中我們發(fā)現(xiàn)，細胞膜SFPQ可增強細胞對阿霉素的敏感性。進一步

7、的研究顯示，細胞膜SFPQ可能通過抑制細胞增殖和克隆形成能力而減緩細胞生長，從而維持HL60細胞對阿霉素的敏感性。在對影響細胞增殖能力可能機制的研究中我們發(fā)現(xiàn)，細胞膜SFPQ通過誘導(dǎo)細胞凋亡和減少細胞S期比例減少DNA復(fù)制而抑制細胞增殖。該結(jié)果系首次報道HL60細胞膜表面蛋白SFPQ為一耐藥相關(guān)蛋白。
　　 綜上結(jié)果，我們認為細胞膜SFPQ可作為人早幼粒細胞白血病阿霉素耐藥的新的細胞膜靶點，并且該靶點有可能成為檢測和診斷該類白血