Perifosine的抗白血病作用及慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株對(duì)其耐藥機(jī)制的體外研究.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、第一部分:研究PRF對(duì)AML和CML細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制及誘導(dǎo)凋亡的情況
   目的:
   研究和比較PRF對(duì)AML和CML細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用及誘導(dǎo)凋亡的情況。從而為進(jìn)一步研究PRF的抗白血病作用機(jī)制打下基礎(chǔ)。
   方法:
   MTT法檢測(cè)PRF對(duì)白血病細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用,AV/PI流式細(xì)胞檢測(cè)術(shù)檢測(cè)PRF誘導(dǎo)白血病細(xì)胞株的凋亡情況,Hoechst染色法觀察PRF誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變,We

2、stern-blot法檢測(cè)PRF作用后caspase-3、caspase-9和PARP蛋白的表達(dá)變化,Western-blot法檢測(cè)白血病細(xì)胞株相關(guān)基因蛋白的表達(dá)情況。
   結(jié)果:
   (1)0~20μmol/L的PRF作用CML細(xì)胞株K562、K562/G以及AML細(xì)胞株Kasumi-1、HL-6024小時(shí)后,IC50分別是121.74、311.3、11.08、11.14μmol/L,作用48小時(shí)后IC50分別是5

3、6.28、141.75、4.24、3.62μmol/L。表明AML細(xì)胞株對(duì)PRF敏感,而CML細(xì)胞株則不敏感。(2)10μmol/L的PRF分別作用K562、K562/G、Kasumi-1和HL-60細(xì)胞株24小時(shí)后,AV/PI流式術(shù)檢測(cè)顯示凋亡率分別為8.23%、7.37%、26.72%、25.80%,表明PRF可顯著誘導(dǎo)AML細(xì)胞株凋亡,而對(duì)CML細(xì)胞株不敏感。(3)10μmol/L的PRF作用24H后,AML細(xì)胞株Kasumi-1

4、和HL-60的細(xì)胞核內(nèi)可見明顯的凋亡小體,而CML細(xì)胞株K562和K562/G中則未見凋亡小體,從形態(tài)學(xué)上證明PRF可以誘導(dǎo)AML細(xì)胞發(fā)生凋亡,但基本不誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡。(4)PRF誘導(dǎo)AML細(xì)胞凋亡時(shí),caspase-3、caspase-9、PARP蛋白激活,而CML細(xì)胞株的caspase-3、caspase-9、PARP則未見激活。(5)AML細(xì)胞株Kasumi-1和HL-60在經(jīng)PRF作用24小時(shí)后,AKT和P-AKT的表達(dá)有明

5、顯的下調(diào),JNK和P-JNK可見明顯的上調(diào),而對(duì)PRF不敏感的CML細(xì)胞株K562和K562/G中這些蛋白的表達(dá)水平無明顯變化。
   第二部分:研究CML細(xì)胞株對(duì)PRF耐藥的機(jī)制以及自噬在其中的作用
   目的:
   進(jìn)一步研究CML細(xì)胞株K562和K562/G對(duì)PRF耐藥的潛在機(jī)制,以及自噬在其中的作用。從而為CML的治療提供更為有效的藥物打下基礎(chǔ)。
   方法:
   通過吖啶橙染色、透射

6、電鏡和LC3-GFP-K562熒光改變檢測(cè)PRF誘導(dǎo)CML細(xì)胞K562產(chǎn)生自噬,Western-blot法檢測(cè)PRF作用K562細(xì)胞后LC3及自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)變化,MTT法檢測(cè)PRF聯(lián)合CQ對(duì)CML細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用。
   結(jié)果:
   (1)PRF可以誘導(dǎo)CML細(xì)胞株發(fā)生自噬,且呈濃度依賴性。(2)PRF誘導(dǎo)CML細(xì)胞發(fā)生的自噬伴隨Atg-5的上調(diào),卻未見Beclin-1和Atg-7的上調(diào),為非Beclin-1依

7、賴性的。(3)PRF誘導(dǎo)CML細(xì)胞產(chǎn)生的自噬被抑制后,可以增強(qiáng)PRF對(duì)CML細(xì)胞的殺傷作用,表明該種自噬起保護(hù)性作用。
   結(jié)論:
   PRF可以下調(diào)Akt,顯著抑制AML細(xì)胞株Kasumi-1和HL-60生長(zhǎng)并誘導(dǎo)凋亡,但對(duì)CML細(xì)胞株K562和K562/G則無此作用。PRF對(duì)CML耐藥可能與其誘導(dǎo)CML細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)性自噬有關(guān),該種自噬為非Beclin-1依賴性的,抑制自噬可以增強(qiáng)PRF對(duì)CML細(xì)胞的殺傷作用,誘導(dǎo)

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