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文檔簡介
1、 研究通過應(yīng)用氟尿嘧啶(5-FU)建立大鼠體內(nèi)氣管損傷修復(fù)模型,使用流式細胞儀分離出的側(cè)群(SP)細胞。采用光鏡、免疫組化、熒光染色等方法,觀察氣管上皮修復(fù)過程并對干細胞加以定位研究;采用免疫熒光及RT-PCR方法對氣管干細胞中ABCG2在蛋白及mRNA水平的表達加以研究。并通過半定量RT-PCR法動態(tài)觀察了氣管干細胞增殖分化過程中Shh信號傳導(dǎo)通路的變化。 研究表明:1.發(fā)現(xiàn)5-FU作用后氣管上皮剩余的G0期細胞中存
2、在著干細胞,正是由于這些干細胞的增殖分化,氣管上皮才得以修復(fù)。2.大鼠氣管干細胞性狀分析:是對5-FU有抗性的、PCNA染色陰性、處于G0期、形態(tài)上未分化的細胞。3.5-FU作用后,免疫熒光檢測顯示ABCG2陽性細胞增多,RT-PCR可見ABCG2/Bcrp1表達,由于以往研究表明ABCG2/Bcrp1可作為確定SP干細胞的表型標記,故進一步證實5-FU作用后殘留的G0期細胞中含有干細胞。4.正常組織、5-FU作用30min時及損傷修復(fù)
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