運用寡核苷酸芯片鑒定檢測食源性致病菌技術的研究.pdf

1、致病菌污染食品可導致多種疾病的暴發(fā)與流行，嚴重威脅人類的健康。因此，若想有效控制食品細菌性疾病的發(fā)生，快速而準確地檢測食品中致病菌是關鍵的技術基礎之一。傳統(tǒng)的細菌培養(yǎng)方法及生化鑒定，操作繁瑣，且需要數(shù)天才能得到結果。免疫學方法和探針雜交技術也存在特異性或敏感性的問題。常規(guī)PCR一次只能檢出一種致病菌，對食品中分離的未知菌，或有多種細菌污染的樣品則顯得無從下手。為了實現(xiàn)對食品中致病菌的快速檢測與鑒定，預防腸道細菌性疾病的發(fā)生，我們運用寡核

2、苷酸芯片技術建立了對常見食源性致病菌進行檢測的方法，檢測的目的菌株是霍亂弧菌、腸出血性大腸桿菌O157：H7、副溶血性弧菌、耶爾森氏菌、單增李氏菌、富氏志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、空腸彎曲菌、金黃色葡萄球菌。我們利用在細菌分類學上具有重要意義的16SrRNA和23SrRNA基因作為檢測的靶分子，并在其間設計探針，建立一套食品致病菌的基因芯片快速檢測技術。不同細菌的16SrRNA和23SrRNA基因具有序列一致的恒定區(qū)和序列不同的可變區(qū)，恒

3、定區(qū)和可變區(qū)交錯排列。這樣，我們在恒定區(qū)設計PCR引物，在可變區(qū)設計檢測探針；用四對引物在同一反應條件下就可以將全部九種致病菌的相應基因片段擴增出來，再用每種細菌的特異性探針陣列與標記的靶片段進行雜交反應，雜交后用專用設備讀取分析熒光信號，可以定性和半定量地檢出致病菌。通過雜交結果可以看出設計的探針特異性強，并且相對于傳統(tǒng)的方法操作簡單、用時少，穩(wěn)定性、重復性都非常好，靈敏度可達到1.6×103cfu/mL，另外，我們還對單獨DNA模板