HPV分型檢測寡核苷酸芯片的初步研究.pdf

1、背景 人類乳頭狀瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)屬于Papovaviridae家族，是一種雙鏈環(huán)狀DNA病毒，大小約8000bp，目前已發(fā)現(xiàn)了200多種亞型。HPV感染是宮頸癌發(fā)生的主要病因，持續(xù)高危型HPV的感染是癌前病變和浸潤性宮頸癌發(fā)展的必要因素。由于不同亞型HPV的致病機制和致癌危險性各不相同，因此對HPV各亞型進行分型檢測有重要的臨床意義。目前，臨床上對HPV進行分型檢測主要依靠熒光實時PCR技

2、術，但該方法檢測通量低，一個反應管中只能檢測一個亞型，難以滿足臨床上同時檢測多個亞型的需要。本研究探討了利用寡核苷酸芯片技術同時檢測HPV多個亞型的可能。 目的 建立帶有不同亞型HPVL1基因片段的哺乳動物細胞克??；在此基礎上初步探討利用寡核苷酸芯片技術對HPV的分型檢測的可能。 方法 1、建立帶有不同亞型HPVL1基因片段的哺乳動物細胞克隆用做標準陽性對照。 2、收集NCBI數(shù)據(jù)庫中的HPV各亞

3、型的序列信息，設計相應的探針。 3、利用基因芯片技術及熒光定量PCR方法對HPV進行分型檢測。 結果 1、成功克隆了30個宮頸癌相關亞型HPVL1基因片段，成功構建并篩選出6個攜帶有HPV各亞型L1基因片段的細胞株。 2、初步制備出可以分型檢測HPV的寡核苷酸芯片并建立了相應的檢測方法。 結論 應用重疊延伸PCR的方法，成功克隆了30個宮頸癌相關亞型HPVL1基因片段并構建6個攜帶有HPV