微型寡核苷酸芯片檢測腦脊液病原菌的初步研究.pdf

1、　　目的:初步研究和建立微型寡核苷酸芯片快速檢測腦脊液標本中常見病原菌的方法，為最終完善并建立腦脊液病原微生物感染寡核苷酸檢測芯片的技術(shù)路線和實驗方案進行初步探索。方法:①通過對腦脊液標本中常見病原菌16SrRNA基因保守區(qū)的序列分析，設計通用引物(UP)，對不同細菌的DNA進行UP-PCR擴增，確定標本是否有細菌感染。②用PrimerPremier軟件分別設計所有細菌的通用探針、革蘭陽性和陰性菌通用探針、腸桿菌科的屬探針、嗜血桿菌屬探

2、針、腦膜炎奈瑟菌、金黃色葡萄球菌探針、凝固酶陰性葡萄球菌探針、肺炎鏈球菌探針，及產(chǎn)單核李斯特菌探針，將探針加尾后固定于尼龍膜上，制成簡易寡核苷酸芯片。⑨提取各病原體DNA后UP-PCR擴增，擴增過程中用Bio-16-dUTP進行標記；將上述擴增產(chǎn)物變性后分別與點有各種探針的尼龍膜反向雜交，然后用堿磷酶標記鏈霉親合素進行顯色。④對檢測體系的敏感性和特異性進行了測試；⑤利用該寡核苷酸芯片檢測方法對32例經(jīng)臨床實驗室常規(guī)培養(yǎng)鑒定方法確定為細菌