2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩109頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、食源性致病菌的污染不僅在世界范圍內(nèi)危害巨大,而且也嚴(yán)重影響我國進(jìn)出口貿(mào)易,而致病菌的傳統(tǒng)檢測技術(shù)工作流程長、自動(dòng)化水平低,難以適應(yīng)快速檢測的實(shí)際需求,其他常用的檢測方法又不能夠滿足多元檢測的要求?;诖?本研究旨在應(yīng)用高通量懸浮芯片技術(shù),以六種常見的食源性致病菌包括大腸桿菌O157:H7、志賀氏菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌和單核增生李斯特菌為檢測靶標(biāo)物,建立一種新型快速、靈敏、高通量的檢測方法,以彌補(bǔ)現(xiàn)有方法不足,實(shí)現(xiàn)對(duì)食

2、品中致病菌的快速、準(zhǔn)確和高效多元檢測,進(jìn)一步完善高通量懸浮芯片食品安全檢測技術(shù)平臺(tái)。
  本研究以幾種常見的食源性致病菌為靶標(biāo)物,基于核酸特異識(shí)別和抗體特異識(shí)別的原理,實(shí)現(xiàn)了對(duì)多種致病菌靶標(biāo)物的同時(shí)多元檢測;通過對(duì)檢測過程的優(yōu)化和摸索實(shí)驗(yàn)條件,進(jìn)一步提高了懸浮芯片檢測的靈敏度、穩(wěn)定性;通過與PCR檢測方法和雙抗夾心ELISA法的比對(duì)實(shí)驗(yàn),確定了懸浮芯片法檢測的準(zhǔn)確性,與常規(guī)檢測方法相比,懸浮芯片法檢測簡便、快捷,操作簡單,結(jié)果重復(fù)

3、性高,穩(wěn)定可靠。
  本研究的研究內(nèi)容主要包括以下幾個(gè)方面:
  1、基于致病菌16SrDNA的懸浮芯片多重檢測
  以四種常見的食源性致病菌大腸桿菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌和金黃色葡萄球菌為靶標(biāo)物,以16SrRNA為靶基因,分別設(shè)計(jì)基于上述四種目標(biāo)物的特異性引物及探針,將設(shè)計(jì)的探針與羧基化的聚苯乙烯微球偶聯(lián),特異性地捕獲PCR擴(kuò)增片段,從而達(dá)到檢測目標(biāo)菌的目的。
  對(duì)懸浮芯片檢測致病菌核酸的探針特異性及最佳雜

4、交溫度進(jìn)行了優(yōu)化,經(jīng)探針特異性驗(yàn)證,所設(shè)計(jì)探針特異性較好,無明顯交叉反應(yīng);對(duì)偶聯(lián)探針的微球與目標(biāo)物雜交溫度條件進(jìn)行了摸索,確定最佳雜交溫度為42℃。同時(shí)還對(duì)單通道和多通道檢測探針的靈敏度進(jìn)行了驗(yàn)證,最終單通道檢測探針靈敏度結(jié)果如下:大腸桿菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌為5×10-6mmol/L,金黃色葡萄球菌為5×10-5mmol/L,多通道檢測探針的靈敏度結(jié)果如下:大腸桿菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌和金黃色葡萄球菌均為1.25×10-4mm

5、ol/L。優(yōu)化了多重PCR檢測的樣品加入量,加入15μl多重?cái)U(kuò)增產(chǎn)物產(chǎn)生的熒光信號(hào)與單一PCR產(chǎn)物的熒光信號(hào)大致相當(dāng)。將四種致病菌計(jì)數(shù)后分別添加到四種蔬菜中,利用懸浮芯片檢測,結(jié)果表明大腸桿菌在油菜中的檢測限和副溶血性弧菌在生菜中的檢出限均為103CFU/ml,沙門氏菌在黃瓜中和金黃色葡萄球菌在辣椒中的檢出限為100CFU/ml。
  2、基于致病菌特有基因的懸浮芯片多重檢測
  針對(duì)大腸桿菌O157:H7、志賀氏菌、沙門氏

6、菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌和單核增生李斯特菌的各自特有基因,設(shè)計(jì)引物,在引物擴(kuò)增區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)能夠區(qū)別其他菌株的特異性探針,通過探針特異性驗(yàn)證、探針靈敏度實(shí)驗(yàn)、方法特異性實(shí)驗(yàn)等證明該方法可以特異性的檢測六種致病菌,與常規(guī)PCR方法比較,檢測靈敏度明顯高于常規(guī)方法,多通道檢測探針靈敏度為1.6×10-6mmol/L,對(duì)單一PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測最低檢出限為20-4×103CFU/ml,多重PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測最低檢出限為1-10CFU/ml

7、,不僅可以滿足日常食品安全檢測的要求,甚至可以滿足臨床樣品的檢測要求。
  3、基于雙抗夾心法的致病菌免疫懸浮芯片檢測技術(shù)研究
  分別制備了志賀氏菌、沙門氏菌和單核增生李斯特菌的多克隆抗體并生物素標(biāo)記;建立了病原體蛋白懸浮芯片定量檢測方法;優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)的條件;討論了方法的特異性、靈敏度、檢測范圍、定量檢測能力,并與臨床常用的雙抗夾心ELISA方法進(jìn)行了系統(tǒng)地對(duì)比。
  本研究通過建立高通量致病菌檢測的懸浮芯片技術(shù),通過

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論