肺炎克雷伯菌耐藥突變選擇窗的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：
　　 體外測(cè)定氟喹諾酮類(lèi)藥物左氧氟沙星對(duì)臨床分離肺炎克雷伯菌的最低抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)和防突變濃度(Mutant Prevention
　　 Concentration,MPC)。建立小鼠肺部肺炎克雷伯菌感染模型,測(cè)定相關(guān)藥代/藥效動(dòng)力學(xué)(PK/PD)參數(shù),觀察藥物濃度對(duì)耐藥突變菌株富集程度的影響,結(jié)合體外實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果,在動(dòng)物體內(nèi)初步驗(yàn)證突變選擇窗(

2、MSW)理論,并通過(guò)MSW理論與已有的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),對(duì)臨床左氧氟沙星治療肺炎克雷伯菌肺炎的給藥策略進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 方法
　　 采用CLSI規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)瓊脂平皿二倍稀釋法,測(cè)定氟喹諾酮藥物左氧氟沙星對(duì)臨床分離肺炎克雷伯菌的MIC和MPC,計(jì)算選擇指數(shù)(SI),選擇銅綠假單胞菌ATCC27853作為質(zhì)控菌株；鼻腔滴注法建立小鼠肺部肺炎克雷伯菌感染模型,比較不同接種劑量組死亡情況,確定最佳造模劑量；根據(jù)最終確定造模劑量建立小

3、鼠肺部肺炎克雷伯菌感染模型,通過(guò)灌胃方法分別給予15mg/kg、30 mg/kg、60mg/kg和90 mg/kg左氧氟沙星治療,考察不同劑量組耐藥突變株的出現(xiàn)頻率及治療后MIC變化情況,評(píng)價(jià)不同劑量組與細(xì)菌耐藥突變株富集擴(kuò)增的關(guān)系；采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定模型組小鼠治療一天、三天、五天、七天后的左氧氟沙星血藥濃度,參考相關(guān)PK/PD常數(shù),結(jié)合體外測(cè)定MPC和MSW值評(píng)價(jià)臨床應(yīng)用左氧氟沙星治療細(xì)菌性感染的劑量與療效關(guān)系。

4、>　　 結(jié)果
　　 體外測(cè)定臨床分離肺炎克雷伯菌的MIC和MPC分別為0.0625μg/ml和1μg/ml,SI=16,根據(jù)CLSI藥敏標(biāo)準(zhǔn),此菌株為對(duì)左氧氟沙星敏感菌株；三個(gè)接種劑量組死亡率無(wú)明顯差異,綜合考慮接種時(shí)間、接種劑量等方面因素,確定最終接種濃度為108CFU/ml,接種劑量為30μl；給予不同劑量左氧氟沙星治療過(guò)程中,15 mg/kg劑量組和90mg/kg劑量組,突變率較恒定,無(wú)明顯升高,MIC值多無(wú)變化,而30

5、mg/kg和60mg/kg劑量組突變率明顯升高,MIC值升高的動(dòng)物數(shù)明顯增多,30mg/kg主要選擇低水平突變,MIC值較接種時(shí)升高2倍,而60mg/kg劑量組則主要選擇高水平突變,MIC值較接種時(shí)升高8倍；HPLC測(cè)定結(jié)果表明,在治療期間內(nèi),血藥濃度位于MSW內(nèi)的時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)菌的突變率越高。
　　 結(jié)論
　　 不同劑量左氧氟沙星治療肺炎克雷伯菌感染的細(xì)菌突變率不同,不適當(dāng)劑量的藥物雖可以達(dá)到治療目的,卻會(huì)引起細(xì)菌突變株