肺炎克雷伯菌耐藥機制及分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：了解臨床分離到的肺炎克雷伯菌耐藥性，檢測β-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類藥物修飾酶、氯己定-磺胺等相關(guān)耐藥基因以及分析菌株間的親緣性；研究肺炎克雷伯菌碳青霉烯類抗生素耐藥的分子機制。
　　 方法：使用PhoenixTM-100系統(tǒng)進行細菌鑒定及藥敏試驗，濃度梯度法(E-test)測定細菌對各種抗菌藥物最低抑菌濃度；采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增β-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類藥物修飾酶、氯己定-磺胺等耐藥基因及2種膜孔蛋白基因，并對擴增產(chǎn)

2、物進行基因測序；超聲破碎及超速離心法提取細菌膜孔蛋白并用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行分析。
　　 結(jié)果：(1)臨床分離的53株肺炎克雷伯菌對亞胺培南全部敏感，而對其余9種抗生素的耐藥率均高于60％。從53株肺炎克雷菌中檢出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、LEN、OKP和DHA8種β-內(nèi)酰胺酶基因，陽性率分別為75.5％、13.2％、10％、7.5％、11.3％、5.

3、7％、1.9％和41.5％，其中49株菌至少檢出1種β-內(nèi)酰胺酶基因，29株菌同時檢出2種以上β-內(nèi)酰胺酶基因，2株菌最多同時檢出6種β-內(nèi)酰胺酶基因，只有4株菌沒有檢出β-內(nèi)酰胺酶基因。aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-I b和ant(3”)-I b在53株肺炎克雷伯菌中的陽性率分別為90.6％，49.1％和24.5％。qacE△1-aul1基因的陽性率為90.6％。聚類分析顯示18株菌中存在兩株克隆株，其耐藥表型基本一致。(2)20

4、10年分離出的5株肺炎克雷伯菌(Kp01、Kp02、Kp03、Kp04、Kp05)對哌拉西林、哌拉西林/三唑巴坦、阿莫西林/克拉維酸、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢吡肟和氨曲南的MIC均≥128μ g/ml，而對亞胺培南、美洛培南的MIC≥32μ g/ml。5株肺炎克雷伯菌均攜帶blaTEM-1和blaDHA-1基因。Kp01、Kp03同時出現(xiàn)ompK35、ompK36基因缺失，Kp02、Kp04、Kp05的ompK36基因出現(xiàn)堿基插入，Kp

5、02、Kp05的ompK35基因存在缺失。與GenBank(GU945384)比較，Kp04的ompK35基因第465位G→C和466位T→C發(fā)生突變，致Gln155His、Tyr156His氨基酸替換，可能成為一新的亞型。
　　 結(jié)論：(1)肺炎克雷伯菌已攜帶多種β-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類修飾酶等多種耐藥基因，與β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類抗菌藥物耐藥密切相關(guān)。聚類分析表明存在克隆傳播的醫(yī)院感染。(2)產(chǎn)DHA-1型β-內(nèi)酰胺酶合并