中國碳青霉烯耐藥腸桿菌科菌流行病學(xué)及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、[目的]研究碳青霉烯耐藥腸桿菌科菌的感染危險因素、臨床預(yù)后、分子流行病學(xué)以及耐藥機(jī)制。
　　[方法]收集2004-2012年我國34家教學(xué)醫(yī)院的342株碳青霉烯耐藥腸桿菌科菌。采用病例-對照研究分析碳青霉烯耐藥腸桿菌科菌感染的危險因素和臨床預(yù)后。采用對倍瓊脂稀釋法測定抗菌藥物的最低抑菌濃度;多位點序列分析(MLST)和脈沖場凝膠電泳(PFGE)分析CRE的同源性。采用改良的Hodge試驗檢測菌株產(chǎn)的碳青霉烯酶;聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PC

2、R)檢測包括碳青霉烯酶基因在內(nèi)的多種β內(nèi)酰胺酶基因;對PCR陽性產(chǎn)物進(jìn)行序列測定以確定基因型別;接合試驗檢測耐藥基因的可移動性;質(zhì)粒提取試驗分析菌株攜帶的質(zhì)粒;Southern雜交進(jìn)行碳青霉烯酶基因定位;全質(zhì)粒序列測序和分析進(jìn)行碳青霉烯酶基因環(huán)境研究;十二烷基磺酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析菌株的外膜孔通道蛋白。基因克隆技術(shù)研究marR基因突變對大腸埃希菌碳青霉烯耐藥的影響。
　　[結(jié)果]CRE感染的臨床治療失敗

3、率76.7％?！案腥綜RE前2個月內(nèi)廣譜抗生素使用大于7天”是CRE感染的獨立危險因素（OR=19.088，P=0.006）。CRE敏感性較高的藥物包括多粘菌素B（總體敏感率96.1％），替加環(huán)素（總體敏感率84.2％）和阿米卡星（總體敏感率55.5％）。342株CRE菌株中241株(70.5％)攜帶碳青霉烯酶基因，其中173株攜帶blaKPC-2基因，26株攜帶blaNDM-1基因，42株攜帶blaIMP-type基因。產(chǎn)KPC-2酶

4、的菌株在近年間的數(shù)量上升迅速，產(chǎn)NDM-1酶的菌株在2010年開始出現(xiàn)，近年來也呈現(xiàn)增長趨勢。產(chǎn)KPC-2酶的CRE菌株主要分布于浙江省、北京市和江蘇省。多位點序列分析發(fā)現(xiàn)152株產(chǎn)碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌中105株(69.1％)為ST11型。29株產(chǎn)碳青霉烯酶的大腸埃希菌屬于17種ST型別。不同的碳青霉烯酶基因經(jīng)Southern雜交證實位于不同大小的質(zhì)粒上。全質(zhì)粒測序的結(jié)果顯示轉(zhuǎn)座子、插入序列以及整合子等多種可移動元件在碳青霉烯酶基因

5、的傳播中扮演重要作用。外膜蛋白分析顯示外膜蛋白缺失為不產(chǎn)碳青霉烯酶CRE的主要耐藥機(jī)制。MarR突變分析研究顯示MarR的Gln42Arg突變可引起MarR功能失活，從而提高M(jìn)arA的表達(dá)，進(jìn)而提升大腸埃希菌對碳青霉烯類藥物的耐藥性。
　　[結(jié)論]本研究是一項全國多中心的連續(xù)9年CRE流行病學(xué)和耐藥機(jī)制研究。闡明了CRE感染的高治療失敗率和危險因素，分子流行病學(xué)顯示產(chǎn)碳青霉烯酶菌株是主要的CRE類型，且ST11型為中國主流的碳青霉