SM22α抑制球囊損傷誘導(dǎo)的新生內(nèi)膜形成.pdf

1、目的：經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈成形術(shù)（percutaneous transluminal coronary angioplasty，PTCA）是目前治療冠心病的安全、有效方法之一，但其遠(yuǎn)期效果受到局部血管再狹窄（restenosis，RS）的影響。
　　 平滑肌22 alpha（smooth muscle22 alpha，SM22α）是血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）的一種分化標(biāo)志物，

2、其表達(dá)具有平滑肌組織特異性和細(xì)胞表型特異性。為了探討SM22α與血管內(nèi)膜增生的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)利用本室構(gòu)建的SM22α腺病毒載體表達(dá)系統(tǒng)，將其導(dǎo)入內(nèi)膜剝脫的頸總動(dòng)脈壁，觀察其在血管壁中的表達(dá)，以及對(duì)球囊損傷誘導(dǎo)的血管內(nèi)膜增生的影響，揭示SM22α抑制內(nèi)膜增生的分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 1頸總動(dòng)脈球囊損傷動(dòng)物模型的復(fù)制及分組
　　 將SD大鼠（250～300 g）常規(guī)麻醉消毒，沿頸部正中線切口，分離暴露左側(cè)頸總動(dòng)

3、脈與頸外動(dòng)脈，在頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端剪一楔形切口，球囊導(dǎo)管自切口插入至主動(dòng)脈分支處，充盈球囊后將其拖回至頸外動(dòng)脈切口處，如此反復(fù)三次，球囊減壓后退出。夾閉頸總動(dòng)脈近心端，由切口處注入20μlpAd-SM22α溶液，結(jié)扎頸外動(dòng)脈，關(guān)閉切口。20 min后打開(kāi)近心端血管夾，恢復(fù)血流。
　　 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為三組，uninfected組、pAd組和pAd-SM22α組。
　　 2標(biāo)本的處理
　　 術(shù)后從股動(dòng)脈放血處死大鼠。取大鼠

4、頸總動(dòng)脈并將血管分為兩部分，一部分勻漿，提取組織蛋白，用Western blot方法檢測(cè)血管壁中SM22α、p-Raf-1、p-MEK1/2和p-ERK1/2的表達(dá)變化。另一部分做病理切片，HE染色觀察血管內(nèi)膜增生情況并進(jìn)行形態(tài)測(cè)量學(xué)分析，其余切片行免疫組織化學(xué)染色，觀察SM22α、PCNA和p27在血管壁中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1外源性SM22α在血管壁中的表達(dá)
　　 Western blot結(jié)果顯

5、示，pAd-SM22α組中SM22α的表達(dá)水平明顯高于uninfected組和pAd組。同時(shí)，免疫組織化學(xué)染色亦顯示，在pAd-SM22α轉(zhuǎn)染組血管壁中，SM22α的表達(dá)量明顯增加，陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)量及著色強(qiáng)度較其余兩組明顯增強(qiáng)，與Western blot結(jié)果一致。
　　 2過(guò)表達(dá)SM22α抑制球囊損傷誘導(dǎo)的血管內(nèi)膜增生
　　 形態(tài)學(xué)分析顯示，球囊損傷14天后，uninfected組與pAd組中膜內(nèi)的VSMC排列紊亂，內(nèi)膜

6、呈彌散性增厚，管腔縮小，內(nèi)膜/中膜（intima/media，I/M）比值分別為2.43±0.21和2.19±0.19，兩組之間無(wú)明顯差異。而pAd-SM22α組血管內(nèi)膜的增生程度和I/M比值（0.68±0.12）明顯小于uninfected組和pAd組（P<0.05）。以上結(jié)果表明，SM22α過(guò)表達(dá)可以明顯抑制球囊損傷誘導(dǎo)的血管內(nèi)膜增生。
　　 3 SM22α過(guò)表達(dá)抑制血管壁PCNA的表達(dá)，促進(jìn)p27的表達(dá)
　　 免疫

7、組化結(jié)果顯示，球囊損傷14天時(shí)，在uninfected組與pAd組中，PCNA陽(yáng)性染色的細(xì)胞數(shù)量及單細(xì)胞染色強(qiáng)度均較高并且主要分布在新生內(nèi)膜層；在pad-SM22α組中，PCNA在血管壁中陽(yáng)性棕色顆粒數(shù)量較少、顏色較淺。而p27的表達(dá)與之相反，在uninfected組與pAd組血管壁中，陽(yáng)性著色較淺；在pAd-SM22α組中的表達(dá)則是明顯增高。上述結(jié)果提示，SM22α過(guò)表達(dá)抑制球囊損傷后血管壁中PCNA的表達(dá)，促進(jìn)p27的表達(dá)。

8、　　 4 SM22α過(guò)表達(dá)可抑制球囊損傷誘導(dǎo)的Raf-1、MEK1/2和ERK1/2的磷酸化活化
　　 Western blot結(jié)果顯示，與uninfected組和pAd組相比較，pAd-SM22α組中Raf-1、MEK1/2和ERK1/2的磷酸化水平顯著下降，SM22α對(duì)ERK/MAPK途徑具有較強(qiáng)的抑制作用，而uninfected組與pAd組相比，上述三種蛋白磷酸化水平無(wú)顯著差異。結(jié)果提示，SM22α過(guò)表達(dá)抑制Raf-1、

9、MEK1/2和ERK1/2的磷酸化活化。
　　 結(jié)論：
　　 1成功建立頸總動(dòng)脈腔內(nèi)感染pAd-SM22α腺病毒載體的模型。
　　 2 SM22α過(guò)表達(dá)顯著抑制內(nèi)皮剝脫誘導(dǎo)的血管內(nèi)膜增生。
　　 3外源性SM22α可下調(diào)增殖相關(guān)基因PCNA表達(dá)和上調(diào)細(xì)胞周期抑制因子p27表達(dá)。
　　 4 SM22α過(guò)表達(dá)可抑制球囊損傷誘導(dǎo)的Raf-1、MEK1/2和ERK1/2的磷酸化活化，通過(guò)阻斷Raf-1-M