逆轉錄病毒介導E1A激活基因阻遏子過表達抑制頸動脈球囊損傷大鼠新生內膜形成.pdf

1、本研究為進一步觀察E1A激活基因阻遏子(CREG)對VSMCs分化的影響及其在血管損傷后RS發(fā)生中的作用，以在體頸動脈大鼠球囊損傷模型為研究對象，應用逆轉錄病毒載體介導CREG基因在損傷血管中大量表達并觀察CREG表達對VSMCs表型轉換的調控及對損傷血管內膜增生的影響，以期深入探討CREG基因在經皮冠脈內介入治療術(PCI)術后再狹窄發(fā)生中的作用。 研究方法：建立大鼠頸動脈球囊拉傷模型，應用pluronic膠F127涂布逆轉錄

2、病毒pLNCX-CREG和pLNCX-GFP于損傷動脈外膜，分別于球囊損傷和逆轉錄病毒轉染后2天、4天、7天、14天和28天切取受損動脈段。蘇木精-曙紅染色觀察冰凍切片中血管形態(tài)學改變。精確測量每段血管內膜層和中間層面積，計算內膜層/中間層比率以判定內膜增生情況。免疫組化或Westernblot分析CREG，SMα-actin，desmin和ki-67的表達，TUNEL染色觀察細胞凋亡。 研究結果：應用大鼠血管損傷模型觀察CRE

3、G對血管損傷后內膜增生的作用顯示，與未損傷組比較，單純血管損傷后的第2天、第4天CREG表達量分別顯著降低約35％和37％，至損傷后第7天基本恢復損傷前水平；同時，血管內膜中細胞增殖標記蛋白ki-67在損傷后第2天開始表達，于第4～7天達到高峰，在第14天顯著降低。與ki-67相反，平滑肌分化標志蛋白SMα-actin和desmin在損傷后第2～14天表達減少，14天后逐漸恢復正常。TUNEL分析顯示，受損血管中血管平滑肌細胞凋亡發(fā)生的

4、時相與細胞增殖時相基本一致。在損傷血管外膜涂布含有pLNCX-CREG或pLNCX-GFP逆轉錄病毒的PluronicF127后，熒光顯微鏡觀察到感染后第2～28天中膜及外膜層均有GFP蛋白大量表達。與之對應，CREG感染組大鼠球囊損傷后2～4天，血管損傷局部的CREG蛋白表達較GFP組比較明顯增加。同時，血管切片分析顯示：損傷后7、14、28天，CREG感染組內膜增生面積較GFP損傷組分別下降32％，59％和60％，內膜/中膜比率分別

5、顯著降低了45％，38％和36％。GFP感染組和單純損傷組比較上述指標均無顯著性差別。與GFP感染組相比，血管損傷后第7、14、28天，CREG感染組血管外膜層面積也明顯減少。進一步應用免疫組化和Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)，血管損傷后第2～4天，CREG感染組血管SMCski-67表達降低，SMα-actin和desmin表達顯著增加；同時，細胞凋亡現(xiàn)象被明顯抑制。ERKMAPK活性分析顯示，與GFP組比較，損傷后第2、4、7、14