SM22α與血管炎癥的相關性研究.pdf

1、目的:動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種血管慢性炎癥反應疾病。內(nèi)皮損傷誘導血管平滑肌細胞(vascularsmoothmusclecell，VSMC)的炎癥應答是血管損傷修復以及內(nèi)膜增生的主要病理基礎。SM22α(smoothmuscle22alpha，SM22α)是一分子量為22kDa的actin結合蛋白，是VSMC分化早期的標志物之一，具有抗增殖，調(diào)節(jié)氧化應激的作用。近期的報道和我室已往研究證實，SM22α缺

2、失與血管氧化應激和炎癥損傷密切相關，但其調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮損傷誘發(fā)的炎性反應具體機制尚不清楚。為了探討SM22α對血管炎性反應的影響及其作用機制，本文從以下幾方面進行了研究。
　　 方法與結果:
　　 1.TNF-α誘導ICAM-1和VCAM-1的表達
　　 用貼塊法分離、培養(yǎng)VSMC，取3～5代細胞進行實驗。傳代培養(yǎng)的VSMC生長至60％～70％匯合時，給予TNF-α(10ng/ml)孵育不同時間(6、12、24h)

3、，觀察ICAM-1和VCAM-1的表達。Westernblot顯示，處理6h時，與對照相比，ICAM-1、VCAM-1表達開始升高，24h達到高峰。表明TNF-α誘導ICAM-1和VCAM-1的表達，具有時效關系。
　　 2.過表達SM22α抑制TNF-α誘導的ICAM-1和VCAM-1表達用GFP-SM22α重組腺病毒感染VSMC后，觀察對TNF-α誘導的ICAM-1和VCAM-1表達的影響，Westernblot結果顯示:S

4、M22α重組腺病毒感染的細胞有高水平的SM22α表達，伴有TNF-α誘導的ICAM-1、VCAM-1表達明顯降低。結果表明，過表達SM22α可抑制VSMC的炎性應答。
　　 3.過表達SM22α抑制TNF-α誘導的p65的乙?；?br>　　 用TNF-α處理VSMC不同時間(0-90min)，觀察對p65乙?；罨挠绊?。結果顯示:TNF-α誘導p65乙?；矫黠@升高，60min達到峰值，為對照組的10倍。在過表達SM22α

5、的VSMC，TNF-α誘導的p65乙?；^空載體轉(zhuǎn)染組降低5倍，結果提示，過表達SM22α可抑制TNF-α誘導的p65的乙?；?。
　　 4.球囊損傷誘導血管內(nèi)膜增生和炎性相關蛋白表達
　　 用大鼠頸總動脈球囊損傷模型，進一步觀察血管內(nèi)膜損傷后，新生內(nèi)膜中炎癥相關蛋白的表達變化，免疫組織化學染色可見，球囊損傷28d時，損傷組中ICAM-1、VCAM-1、MMP-2和MMP-9陽性染色的細胞數(shù)量及單細胞染色強度均高于假手術對

6、照組。
　　 5.血管新生內(nèi)膜細胞p65乙?；缴?br>　　 免疫組化分析結果顯示，球囊損傷28d時，Ac-p65陽性染色的細胞數(shù)量及單細胞染色強度均高于對照組P＜0.05），陽性細胞主要分布在新生內(nèi)膜層。Westernblot得到相似的結果，損傷組血管p65乙?；捷^對照組升高2倍。與細胞水平的發(fā)現(xiàn)相一致。
　　 6.血管新生內(nèi)膜SIRT1、SM22α表達下調(diào)
　　 免疫組織化學染色可見，對照組的血管

7、中膜可見到大量含有棕色顆粒的SM22α陽性細胞;而在球囊損傷組的新生內(nèi)膜VSMC中，SM22α陽性染色顆粒顯著減少(P＜0.05)。Westernblot得到相似的結果，球囊損傷組頸總動脈壁中SM22α和SIRT1的表達水平較對照組分別降低4.4和2.4倍，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:
　　 1.過表達SM22α抑制TNF-α誘導的粘附分子表達。
　　 2.過表達SM22α抑制TNF-α誘導的p65乙?；?。<