苯妥英鈉對大鼠頸總動脈球囊損傷后內膜增生的影響.pdf

1、目的：苯妥英鈉自應用之初，人們就發(fā)現(xiàn)該藥可以引起牙齦增生，由此提示苯妥英鈉可以促進細胞外基質的增生，并在臨床被用于各種創(chuàng)傷修復。經(jīng)皮冠狀動脈介入治療造成血管損傷，導致血管內再狹窄，是臨床中的普遍問題。有研究表明，血管損傷后再狹窄部位細胞外基質含量明顯低于未發(fā)生再狹窄的損傷部位。因此，本實驗旨在研究苯妥英鈉促進創(chuàng)傷修復的特殊藥理學作用在大鼠頸總動脈球囊損傷后內膜修復過程中的影響。 方法：動物實驗采用大鼠(雄性Wistar大鼠)頸總

2、動脈內膜球囊損傷模型(balloon-injurymodel)。術前將大鼠分為普食組和高脂組，喂養(yǎng)4周后，對大鼠左側頸總動脈進行球囊擴張剝脫血管內皮，右側頸總動脈行假手術，即僅分離血管而不行球囊損傷。術后大鼠分為普食損傷組、普食損傷+Phe組、高脂損傷組、高脂損傷+Phe組。分別在術后4天、7天和28天時處死大鼠，取血測定血清總膽固醇濃度，經(jīng)磷酸鹽緩沖液(PhosphateBufferedSolution，PBS)灌注后，取下左側頸總動

3、脈的損傷段及對應部位的右側頸總動脈，石蠟包埋、切片后分別進行蘇木素伊紅(HematoxylinandEosin，HE)、維多利亞藍(Victoriablue)和苦味酸天狼猩紅(picrosiriusred)病理染色以及α-平滑肌肌動蛋白(α-SmoothMuscleActin，α-SMA)、增殖細胞核抗原(ProliferatingCellNuclearAntigen，PCNA)免疫組化染色。經(jīng)數(shù)字CCD掃描后，用圖像分析軟件計算血管內

4、膜面積、中膜面積、管腔面積、內膜面積和中膜面積比(Intimaarea/Mediaarea，I/M)、血管外彈力膜周長、再狹窄率(新生內膜指數(shù))、內膜膠原面積和密度、內膜細胞密度。 結果：1.高脂飲食引起大鼠血清總膽固醇濃度升高(普食組1.76±0.22mmol/Lvs高脂組2_5±0.44mmol/L，p＜0.05)；但損傷未使高脂飲食喂養(yǎng)8周的大鼠頸總動脈形成明顯的動脈粥樣硬化斑塊。 2.術后各時點假手術組血管中均無

5、新生內膜形成。術后4天，損傷血管中無明顯的內膜增生。術后7天，損傷血管內膜輕度增生，主要以細胞成分為主，周圍有少量的細胞外基質成分填充。術后28天，損傷血管內膜明顯增厚，細胞密度降低，細胞外基質成分相對增多。 3.維多利亞藍染色分析：術后7天，苯妥英鈉對損傷血管內膜增生沒有明顯的影響：組間I/M(普食損傷組0.52±0.11vs普食損傷+Phe組0.50±0.12，p＞0.05)無明顯的統(tǒng)計學差異。 術后28天，苯妥英鈉

6、可以抑制血損傷管后內膜增生和管腔變窄：普食損傷+Phe組內膜面積(153604.35±18463.06μm2vs203934.11±54250.16μm2，p＜0.01)、I/M(1.70±0.08vs2.26±0.46，p＜0.01)、再狹窄率(59.47±3.19％vs75.86±13.33％，p＜0.01)明顯小于普食損傷組，管腔面積(106064.00±23569.16μm2vs62897.25±34038.61μm2，p＜0.

7、01)大于普食損傷組；同時高脂損傷+Phe組內膜面積(224239.63±11959.84μm2vs277997.54±38916.58μm2，p＜0.01)、再狹窄率(65.85±7.59％vs77.67±10.78％，p＜0.05)小于高脂損傷組，管腔面積(121229.03±42934.22μm2vs80139.54±39887.73μm2，p＜0.05)大于高脂損傷組。 高脂飲食可以加重損傷血管的內膜增生，并導致血管擴張

8、性重構：高脂損傷組內膜面積(277997.54±38916.58μm2vs203934.11±54250.16μm2，p＜0.01)、I/M(3.07±0.49vs2.26±0.46，p＜0.01)、外彈力膜周長(2376.36±65.15μmvs2098.29±138.94μm，p＜0.01)均大于普食損傷組。 4.HE染色分析：術后7天，損傷血管內膜細胞密度(普食損傷組12064.63±3246.62/mm2vs普食損傷+P

9、he組11247.92±3512.04/mm2，p＞0.05)差別沒有統(tǒng)計學意義；術后28天，苯妥英鈉可以抑制損傷血管內膜細胞數(shù)量的增加：普食損傷+Phe組內膜細胞密度(7218.02±2008.06/mm2vs8484.63±1077.29/mm2，p＜0.05)小于普食損傷組，細胞外基質成分相對增多。 5.苦味酸天狼猩紅染色分析：苯妥英鈉對血管損傷早期增生內膜中膠原組織無明顯影響：術后7天，在偏振光顯微鏡下觀察血管新生內膜中

10、無明顯的膠原組織增生；術后28天，在偏振光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)新生內膜中有少量膠原組織增生，主要以Ⅲ型膠原為主。但組間血管膠原面積(普食損傷組1493.20±1566.30像素/μm2vs普食損傷+Phe組943.50±659.00像素/μm2，p＞0.05)和密度(普食損傷組0.76±0.79％vs普食損傷+Phe組0.70±0.63％，p＞0.05)均無統(tǒng)計學差異。 6.免疫組化染色分析：術后28天，苯妥英鈉可以抑制損傷血管內膜

11、中的血管平滑肌細胞增生：普食損傷+Phe組PCNA陽性細胞計數(shù)(9.89±7.63/200倍視野vs23.03±13.95/200倍視野，p＜0.01)和α-SMA陽性細胞計數(shù)(30.91±20.05/200倍視野va61.81±16.57/200倍視野，P＜0.01)均小于普食損傷組。 結論：大鼠頸總動脈球囊損傷后28天，苯妥英鈉可以抑制損傷血管內膜增生過程中的細胞數(shù)量的增加，促進細胞外基質的合成，抑制血管損傷后的內膜增生和管