快速老化小鼠耳蝸NGF的表達(dá)分布和增齡性變化、以及pcDNA3-β-NGF的構(gòu)建.pdf

1、目的:研究神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor, NGF)在小鼠耳蝸中的表達(dá)分布、以及年齡相關(guān)性變化特點(diǎn),構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3-β-NGF,為老年性耳聾的 NGF基因治療提供支持。
　　方法:選取5、7月齡的快速老化小鼠亞系8(Senescence accelerated dementia mouse/prone, SAMP8)作為實(shí)驗(yàn)組,而同齡抗快速老化小鼠亞系1(Senescence accelerat

2、ed mouse/resistance1, SAMR1)作為 SAMP8的正常對(duì)照組;應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法分別觀察其耳蝸中神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)的表達(dá)分布情況、以及增齡性變化特點(diǎn)。取胎腦組織50g,提取RNA,經(jīng)RT-PCR、XhoI和HindIII雙酶切及T4連接酶連接構(gòu)建真核表達(dá)載體 pcDNA3-β-NGF。
　　結(jié)果:1、NGF在小鼠耳蝸的表達(dá)分布、以年齡相關(guān)性變化特點(diǎn):在小鼠耳蝸中,神經(jīng)生長(zhǎng)因子在螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、內(nèi)外

3、毛細(xì)胞、聽(tīng)神經(jīng)纖維及血管紋中均有表達(dá),且螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、以及內(nèi)外毛細(xì)胞為主要表達(dá)部位。耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、以及內(nèi)外毛細(xì)胞NGF免疫組化染色平均光密度值:耳蝸NGF免疫組化染色圖象分析,與對(duì)照組比較,第5、7月齡SAMP8小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、以及毛細(xì)胞中的NGF蛋白表達(dá)較同齡SAMR1小鼠明顯降低(P<0.05);各組小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 NGF免疫組化染色平均光密度值分別為:5月齡實(shí)驗(yàn)組 S A M P8小鼠:0.281±0.00

4、5,5月齡對(duì)照組 SAMR1小鼠:0.420±0.039,7月齡實(shí)驗(yàn)組 S A M P8小鼠:0.220±0.008,7月齡對(duì)照組SAMR1小鼠:0.342±0.017。7月齡SAMP8與5月齡SAMP8進(jìn)行組內(nèi)比較P<0.01;7月齡SAMP8與7月齡SAMR1進(jìn)行組間比較p<0.01;5月齡SAMP8與5月齡SAMR1進(jìn)行組間比較P<0.01有顯著性差異。各組小鼠耳蝸毛細(xì)胞 NGF免疫組化染色平均光密度值分別為:5月齡實(shí)驗(yàn)組 S A

5、 M P8小鼠:0.291±0.007,5月齡對(duì)照組SAMR1小鼠:0.410±0.011,7月齡實(shí)驗(yàn)組 S A M P8小鼠:0.213±0.009,7月齡對(duì)照組SAMR1小鼠:0.334±0.012。7月齡SAMP8與5月齡SAMP8進(jìn)行組內(nèi)比較P<0.01;7月齡SAMP8與7月齡SAMR1進(jìn)行組間比較P<0.01;5月齡SAMP8與5月齡SAMR1進(jìn)行組間比較P<0.01有顯著性差異。
　　2、真核表達(dá)載體pcDNA3-β