增齡相關(guān)聽力損失小鼠耳蝸和蝸神經(jīng)核MeCP2、BDNF、Atoh1基因表達(dá)的初步研究.pdf

1、目的：本研究在對不同月齡BALB/c小鼠聽功能和耳蝸形態(tài)學(xué)研究的基礎(chǔ)上，通過檢測不同月齡小鼠耳蝸和蝸神經(jīng)核中MeCP2、BDNF和Atohl基因的表達(dá)特點，初步探討其在年齡相關(guān)性聽力損失中的作用，為進一步確定聽覺老化的相關(guān)基因，探討老年性耳聾發(fā)病的分子機制打下基礎(chǔ)。 方法：①通過聽性腦干反應(yīng)( ABR)測試、耳蝸毛細(xì)胞鋪片/計數(shù)及掃描電鏡等方法，對3、6、12和18月齡組小鼠8 kHz聽反應(yīng)閾及耳蝸毛細(xì)胞缺失和Corti器形態(tài)學(xué)

2、變化進行對比研究。②應(yīng)用免疫組化技術(shù)，檢測不同月齡組小鼠耳蝸和蝸神經(jīng)核組織中MeCP2蛋白的表達(dá)與分布情況。③應(yīng)用Western blot技術(shù)，檢測各月齡組小鼠耳蝸和蝸神經(jīng)核中MeCP2的蛋白表達(dá)水平。④應(yīng)用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)( RT-PCR)，對各月齡組小鼠耳蝸和蝸神經(jīng)核中MeCP2、BDNF和Atohl基因的mRNA表達(dá)水平進行檢測。 結(jié)果：①ABR檢測顯示3、6和12月齡組小鼠8 kHz聽反應(yīng)閾分別為(25±5.1

3、)、(52±6.7)、(93±7.5) dB SPL，18月齡組120 dBSPL刺激聲基本測不出聽覺反應(yīng)。耳蝸鋪片毛細(xì)胞計數(shù)自6月齡組外毛細(xì)胞出現(xiàn)顯著缺失，隨月齡增加而加重，由底回逐漸向頂回發(fā)展，至12月齡時耳蝸底回和中回外毛細(xì)胞幾乎完全喪失，內(nèi)毛細(xì)胞顯著缺失。掃描電鏡顯示6月齡組小鼠耳蝸毛細(xì)胞靜纖毛可見不同程度的缺失、轉(zhuǎn)位、散亂、倒伏、融合、變短現(xiàn)象，隨月齡增加而逐漸加重。②免疫組化染色：MeCP2蛋白在BALB/c小鼠耳蝸和蝸神經(jīng)

4、核中均有表達(dá)，主要為細(xì)胞核著色，隨月齡增長，小鼠耳蝸和蝸神經(jīng)核染色陽性程度變?nèi)酢＂踂estern blot檢測：四個不同月齡組小鼠耳蝸和蝸神經(jīng)核組織中MeCP2蛋白表達(dá)濃度隨年齡增長而減弱。④RT-PCR分析：MeCP2、BDNF和Atohl基因的mRNA表達(dá)水平均隨月齡增長逐漸下降。6、12、18月齡組mRNA及蛋白的表達(dá)的光密度比值明顯低于3月齡組，各組間比較有統(tǒng)計學(xué)顯著差異(尸<0.01)。PCR產(chǎn)物測序及BLAST比較分析證實R

5、T-PCR產(chǎn)物與目的基因mRNA序列完全一致。 結(jié)論：①BALB/c小鼠聽力損失、耳蝸毛細(xì)胞缺失和纖毛損害隨年齡增長而逐漸加重。②MeCP2在小鼠耳蝸和蝸神經(jīng)核組織中均有表達(dá)，主要表現(xiàn)為核表達(dá)，其表達(dá)水平呈增齡相關(guān)性減弱。③小鼠耳蝸和蝸神經(jīng)核中MeCP2、BDNF、Atohl基因mRNA表達(dá)水平隨月齡增長而逐漸降低，三種基因的表達(dá)水平呈顯著一致性。④MeCP2及其相關(guān)基因BDNF和Atohl表現(xiàn)出增齡相關(guān)性表達(dá)減弱，它們可能在老