增齡相關聽力損失小鼠耳蝸和蝸神經核MeCP2、BDNF、Atoh1基因表達的初步研究.pdf

1、目的：本研究在對不同月齡BALB/c小鼠聽功能和耳蝸形態(tài)學研究的基礎上，通過檢測不同月齡小鼠耳蝸和蝸神經核中MeCP2、BDNF和Atohl基因的表達特點，初步探討其在年齡相關性聽力損失中的作用，為進一步確定聽覺老化的相關基因，探討老年性耳聾發(fā)病的分子機制打下基礎。 方法：①通過聽性腦干反應( ABR)測試、耳蝸毛細胞鋪片/計數及掃描電鏡等方法，對3、6、12和18月齡組小鼠8 kHz聽反應閾及耳蝸毛細胞缺失和Corti器形態(tài)學

2、變化進行對比研究。②應用免疫組化技術，檢測不同月齡組小鼠耳蝸和蝸神經核組織中MeCP2蛋白的表達與分布情況。③應用Western blot技術，檢測各月齡組小鼠耳蝸和蝸神經核中MeCP2的蛋白表達水平。④應用熒光定量逆轉錄多聚酶鏈反應( RT-PCR)，對各月齡組小鼠耳蝸和蝸神經核中MeCP2、BDNF和Atohl基因的mRNA表達水平進行檢測。 結果：①ABR檢測顯示3、6和12月齡組小鼠8 kHz聽反應閾分別為(25±5.1

3、)、(52±6.7)、(93±7.5) dB SPL，18月齡組120 dBSPL刺激聲基本測不出聽覺反應。耳蝸鋪片毛細胞計數自6月齡組外毛細胞出現顯著缺失，隨月齡增加而加重，由底回逐漸向頂回發(fā)展，至12月齡時耳蝸底回和中回外毛細胞幾乎完全喪失，內毛細胞顯著缺失。掃描電鏡顯示6月齡組小鼠耳蝸毛細胞靜纖毛可見不同程度的缺失、轉位、散亂、倒伏、融合、變短現象，隨月齡增加而逐漸加重。②免疫組化染色：MeCP2蛋白在BALB/c小鼠耳蝸和蝸神經

4、核中均有表達，主要為細胞核著色，隨月齡增長，小鼠耳蝸和蝸神經核染色陽性程度變弱。③Western blot檢測：四個不同月齡組小鼠耳蝸和蝸神經核組織中MeCP2蛋白表達濃度隨年齡增長而減弱。④RT-PCR分析：MeCP2、BDNF和Atohl基因的mRNA表達水平均隨月齡增長逐漸下降。6、12、18月齡組mRNA及蛋白的表達的光密度比值明顯低于3月齡組，各組間比較有統計學顯著差異(尸<0.01)。PCR產物測序及BLAST比較分析證實R

5、T-PCR產物與目的基因mRNA序列完全一致。 結論：①BALB/c小鼠聽力損失、耳蝸毛細胞缺失和纖毛損害隨年齡增長而逐漸加重。②MeCP2在小鼠耳蝸和蝸神經核組織中均有表達，主要表現為核表達，其表達水平呈增齡相關性減弱。③小鼠耳蝸和蝸神經核中MeCP2、BDNF、Atohl基因mRNA表達水平隨月齡增長而逐漸降低，三種基因的表達水平呈顯著一致性。④MeCP2及其相關基因BDNF和Atohl表現出增齡相關性表達減弱，它們可能在老