HA-PEI納米顆粒介導(dǎo)Atoh1基因轉(zhuǎn)導(dǎo)豚鼠耳蝸細(xì)胞的研究.pdf

1、自1994年，F(xiàn)ujiyoshi研究小組成功制備了中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘堿性蛋白基因純合突變導(dǎo)致小鼠感音神經(jīng)性耳聾的模型以來，圍繞感音神經(jīng)性耳聾基因治療的研究逐漸展開。
　　感音神經(jīng)性耳聾主要是由聽覺感受器官---耳蝸的變性引起的。對(duì)人類顳骨解剖學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，感音神經(jīng)性耳聾可由耳蝸多種細(xì)胞類型的變性引起，其中，承擔(dān)將聲音信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)的毛細(xì)胞病變，是目前針對(duì)感音神經(jīng)性耳聾研究的核心問題之一。以往，研究者們認(rèn)為在哺乳動(dòng)物體內(nèi)，耳蝸毛細(xì)胞

2、損傷變性后是不可再生的。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)將包含毛細(xì)胞分化的關(guān)鍵基因---Atoh1/Math1基因的質(zhì)粒導(dǎo)入體外培養(yǎng)的Corti器中，可以產(chǎn)生異位的毛細(xì)胞，本研究小組前期，利用腺病毒作為載體將Atoh1基因成功介導(dǎo)轉(zhuǎn)染至噪聲性聾的豚鼠耳蝸內(nèi)，發(fā)現(xiàn)噪聲損傷的豚鼠耳蝸過表達(dá)Atoh1基因，可使受損耳蝸內(nèi)產(chǎn)生大量新的內(nèi)外毛細(xì)胞纖毛簇，促進(jìn)聽功能的恢復(fù)。雖然腺病毒基因載體有較高的基因轉(zhuǎn)染效率，但是也有很明顯的缺點(diǎn)，其介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染且

3、有很強(qiáng)的宿主免疫原性，且缺乏細(xì)胞特異性，難以通過倫理委員會(huì)的審查應(yīng)用于臨床。此外，與腫瘤的基因治療研究目的不同的是，針對(duì)于腫瘤細(xì)胞的治療研究多是以殺細(xì)胞為目的，可以使用病毒載體，而耳科學(xué)研究多以促進(jìn)細(xì)胞再生或修復(fù)為目的，病毒載體的缺點(diǎn)大大限制了其進(jìn)一步應(yīng)用。因此，為了篩選出適用于耳科研究的非病毒載體，本研究在研究小組前期工作的基礎(chǔ)上，研發(fā)合成新的納米基因載體，并利用其將包含Atoh1基因的質(zhì)粒導(dǎo)入健康及噪聲致聾的豚鼠耳蝸內(nèi)，運(yùn)用聽功能檢

4、測和形態(tài)學(xué)檢測方法對(duì)新載體轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的效率及生物學(xué)效應(yīng)進(jìn)行了初步研究。
　　第一部分，利用透明質(zhì)酸(HA)對(duì)聚乙烯亞胺(PEI)納米顆粒進(jìn)行修飾，獲得基于透明質(zhì)酸修飾的聚乙烯亞胺納米顆粒基因載體(HA-PEI)，利用其介導(dǎo)Atoh1-EGFP基因質(zhì)粒，通過完整圓窗膜滲透途徑對(duì)聽力正常豚鼠及噪聲性聾豚鼠進(jìn)行耳蝸內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)，觀察其在豚鼠耳蝸內(nèi)的轉(zhuǎn)基因能力及生物學(xué)特性。
　　第二部分，利用前期合成的HA-PEI納米基因載體介導(dǎo)Atoh1