豚鼠低強(qiáng)度爆震聾后耳蝸細(xì)胞凋亡及其相關(guān)基因表達(dá)的變化.pdf

1、隨著工礦業(yè)爆炸物以及爆震性武器威力的增加，爆震性耳聾的發(fā)病率越來(lái)越高，它是由綜合致病因素引起的，其致聾機(jī)理尚未完全闡明，爆震所致的內(nèi)耳損傷目前尚無(wú)確切有效的治療方法。近年來(lái)研究表明，耳蝸細(xì)胞凋亡是噪聲及氨基糖甙抗生素致聾導(dǎo)致耳蝸細(xì)胞死亡的主要表現(xiàn)方式，Caspase-3在耳蝸的發(fā)育、耳聾疾病中起重要作用，凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2及Bax在老年沙鼠耳蝸細(xì)胞中表達(dá)并發(fā)揮作用。但耳蝸細(xì)胞凋亡及其相關(guān)基因是否參與低強(qiáng)度耳爆震傷，均尚不十分清楚。為

2、探討低強(qiáng)度爆震性聾誘發(fā)的耳蝸細(xì)胞凋亡及Caspase-3等相關(guān)基因在低強(qiáng)度爆震性聾中的作用(包括表達(dá)、激活、調(diào)控等過(guò)程)，從而為臨床防治爆震性聾等因素造成的感音神經(jīng)耳聾提供理論依據(jù)。本課題進(jìn)行以下三部分研究。第一部分進(jìn)行豚鼠低強(qiáng)度耳爆震傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕ⅲ簯?yīng)用YBD-2000型沖擊波發(fā)生器，以低強(qiáng)度壓縮空氣直接沖擊豚鼠中耳模擬低強(qiáng)度耳爆震傷，進(jìn)行豚鼠中耳解剖、聽(tīng)閾測(cè)試、耳蝸光鏡及電鏡觀察。第二部分探討豚鼠低強(qiáng)度耳爆震傷后耳蝸細(xì)胞凋亡及其相

3、關(guān)基因表達(dá)的變化：在低強(qiáng)度爆震性聾模型上，應(yīng)用TUNEL、熒光染色法及電鏡技術(shù)檢測(cè)凋亡是否是低強(qiáng)度爆震性聾耳蝸損害的一種方式，應(yīng)用免疫組化、原位雜交及WesternBlot技術(shù)檢測(cè)Caspase-3、Bcl-2、Bax、PARP及cytochromec等凋亡相關(guān)分子在低強(qiáng)度爆震性聾后不同時(shí)間耳蝸細(xì)胞凋亡中的改變，采用激光共聚焦檢測(cè)低強(qiáng)度爆震性聾耳蝸細(xì)胞凋亡各時(shí)相點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)鈣的變化情況。第三部分探討Caspase-3特異性抑制劑對(duì)豚鼠低強(qiáng)度

4、耳爆震傷后耳蝸細(xì)胞凋亡的影響：采用ABR、TUNEL、Caspase-3檢測(cè)和透射電鏡檢查等各項(xiàng)指標(biāo)。 實(shí)驗(yàn)的主要結(jié)果和結(jié)論如下： 1.豚鼠低強(qiáng)度耳爆震傷后，ABR反應(yīng)閾發(fā)生大幅度的增加，在12h左右達(dá)到高峰，之后呈下降趨勢(shì)，爆震后7d反應(yīng)閾仍未恢復(fù)。中耳解剖、光鏡及電鏡顯示損傷耳蝸具有爆震性聾的病理特征。提示本實(shí)驗(yàn)YBD-2000型沖擊波發(fā)生器對(duì)豚鼠進(jìn)行低強(qiáng)度耳爆震傷效果穩(wěn)定，所建模型穩(wěn)定、可靠，方法易于掌握，更有利于

5、爆震性聾的實(shí)驗(yàn)研究，為進(jìn)一步探討耳爆震傷的發(fā)生機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 2.低強(qiáng)度耳爆震傷后耳蝸細(xì)胞發(fā)生凋亡現(xiàn)象，與聽(tīng)閾改變一致。Caspase-3參與了低強(qiáng)度耳爆震傷后耳蝸細(xì)胞凋亡的發(fā)生，提示耳蝸細(xì)胞凋亡性損傷的機(jī)制可能是激活了Caspase-3途徑；Bcl-2和Bax與低強(qiáng)度耳爆震傷誘導(dǎo)的耳蝸細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，提示Bcl-2家族參與了低強(qiáng)度耳爆震傷誘導(dǎo)的耳蝸細(xì)胞凋亡。細(xì)胞色素c蛋白在低強(qiáng)度耳爆震傷后各組耳蝸的表達(dá)位置與TUNEL陽(yáng)性細(xì)

6、胞表達(dá)區(qū)域相致，提示低強(qiáng)度耳爆震傷后耳蝸細(xì)胞凋亡中線粒體依賴(lài)凋亡途徑的存在。PARP參與了低強(qiáng)度沖擊波對(duì)耳蝸的損傷，提示低強(qiáng)度耳爆震傷后，細(xì)胞凋亡機(jī)制啟動(dòng)的同時(shí)，其修復(fù)能力亦在加強(qiáng)。低強(qiáng)度耳爆震傷誘導(dǎo)的耳蝸細(xì)胞凋亡過(guò)程中細(xì)胞鈣超載與Caspase-3的激活有一定的關(guān)系。 3.Caspase-3的選擇性四肽抑制劑z-DEVD-fmk能抑制低強(qiáng)度耳爆震傷后耳蝸細(xì)胞凋亡，從而進(jìn)一步證實(shí)了Caspase-3在低強(qiáng)度耳爆震傷誘導(dǎo)的耳蝸細(xì)胞