二甲雙胍對抗下咽癌Fadu細(xì)胞生長的作用及其對化療藥物敏感性影響的研究.pdf

1、目的:檢測二甲雙胍作用于下咽癌Fadu細(xì)胞后其增殖及周期情況的變化，初步研究P21是否參與二甲雙胍所激活的AMPK信號分子相關(guān)通路，并探討二甲雙胍聯(lián)合順鉑、5-氟尿嘧啶及紫杉醇對Fadu細(xì)胞增殖情況的影響，為糖尿病下咽癌患者的藥物治療提供新方案。
　　 方法:
　　 1、體外培養(yǎng)下咽癌Fadu細(xì)胞，予不同濃度的二甲雙胍(0、2mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L)分別作用24

2、h、48h、72h，用MTT法檢測細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期。
　　 2、分別以0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的二甲雙胍作用于Fadu細(xì)胞株，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測細(xì)胞中AMPK、P21表達(dá)情況的變化。
　　 3、體外培養(yǎng)Fadu細(xì)胞，將5mmol/L的二甲雙胍分別與不同濃度的三種化療藥物聯(lián)用，其中順鉑濃度分別為0、0.1μg/ml、0.5μg/ml、2g/ml、4μg/ml，5-氟尿嘧啶為0、4

3、μg/ml、20μg/ml、100μg/ml、500μg/ml，紫杉醇0、lng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml，作用于Fadu細(xì)胞24h、48h、72h，MTT法檢測細(xì)胞增殖情況的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、二甲雙胍作用于Fadu細(xì)胞后可抑制其增殖，并且呈濃度、時間依賴性。隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)方差分析顯示:濃度因素對細(xì)胞存活率有影響，（F=97.411，P＜0.01）;作用時間對細(xì)胞存活率有影響

4、，（F=323.251，P＜0.01）。其中作用48小時二甲雙胍對人下咽癌Fadu細(xì)胞的IC50為15.036mmol/L。流式技術(shù)檢測細(xì)胞周期顯示，二甲雙胍作用可使Fadu細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯，同樣受藥物濃度及作用時間的雙重影響。(P＜0.01)。
　　 2、免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示:二甲雙胍干預(yù)組較對照組AMPK及P21表達(dá)均增高，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。且AMPK蛋白表達(dá)水平與P21蛋白表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.7

5、64，P＜0.05)。
　　 3、二甲雙胍聯(lián)合化療藥物與單獨(dú)應(yīng)用化療藥物干預(yù)Fadu細(xì)胞不同時間，MTT結(jié)果顯示:(1)不同濃度順鉑聯(lián)合5mmol/L二甲雙胍作用不同時間后細(xì)胞增殖抑制率均較單獨(dú)應(yīng)用順鉑增高，作用24小時、48小時、72小時行多因素方差分析顯示聯(lián)合用藥及順鉑單獨(dú)作用對細(xì)胞增殖的影響有差異，P值均小于0.01。計(jì)算48小時聯(lián)合用藥的CI值為0.43，認(rèn)為在人下咽癌Fadu細(xì)胞中二甲雙胍聯(lián)合順鉑作用具有高度協(xié)同作用。

6、(2)低濃度5-氟尿嘧啶（4μg/ml、20μg/ml）聯(lián)合5mmol/L二甲雙胍作用24小時、48小時較單用5-氟尿嘧啶細(xì)胞存活率稍有降低，至作用72小時反而增加;而高濃度5-氟尿嘧啶（500μg/ml）與二甲雙胍聯(lián)合應(yīng)用時在24小時、48小時、72小時均較單獨(dú)應(yīng)用5-氟尿嘧啶細(xì)胞存活率增加。計(jì)算48小時CI值為1.15，認(rèn)為在人下咽癌Fadu細(xì)胞中二甲雙胍對5-氟尿嘧啶有拮抗作用。(3)除1000ng/ml紫杉醇聯(lián)用二甲雙胍作用72

7、小時較單用化療藥物細(xì)胞存活率升高以外，其余各濃度組作用不同時間Fadu細(xì)胞存活率均降低。作用24小時、48小時、72小時各行多因素方差分析顯示聯(lián)合用藥及紫杉醇單獨(dú)作用對細(xì)胞增殖影響有差異，P值均小于0.01。計(jì)算48小時聯(lián)合用藥的CI值為0.37，認(rèn)為在人下咽癌Fadu細(xì)胞中二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇具有強(qiáng)協(xié)同作用。
　　 結(jié)論:
　　 1、二甲雙胍可以抑制人下咽癌Fadu細(xì)胞的增殖，這與二甲雙胍導(dǎo)致細(xì)胞阻滯于G1期相關(guān)，并且二