二甲雙胍調(diào)控Nrf2對非小細胞肺癌EGCG和放射敏感性的影響及機制研究.pdf

1、第一部分：二甲雙胍增加非小細胞肺癌細胞A549對EGCG（表沒食子兒茶素沒食子酸酯）的敏感性
　　目的：研究二甲雙胍對非小細胞肺癌 A549細胞表沒食子兒茶素沒食子酸脂(EGCG)敏感性的影響及其機制。
　　方法：首先利用MTT法和Western Blot法檢測不同非小細胞肺癌細胞株對EGCG的敏感性差異以及細胞株中HO-1表達水平的差異；采用MTT法檢測二甲雙胍能否增加EGCG對A549細胞生長抑制；采用細胞凋亡試劑盒和R

2、OS檢測試劑盒明確二甲雙胍和EGCG對A549細胞凋亡和ROS水平的影響；分別采用Western Blot和免疫熒光檢測二甲雙胍和EGCG對HO-1蛋白及Nrf2蛋白水平的影響及對Nrf2在細胞內(nèi)亞分布的影響；通過分析基因芯片的結(jié)果和實時熒光定量PCR檢測25對肺癌和正常肺組織中HO-1的表達水平了解正常細胞和腫瘤細胞中HO-1表達的差異，并采用MTT法分析EGCG對A549和正常肺上皮BEAS-2B細胞的影響。采用裸鼠皮下接種A549

3、細胞的方法建立A549細胞裸鼠移植瘤模型；二甲雙胍200μg/mL溶于飲用水給藥，EGCG50mg/kg隔天腹腔注射給藥。采用游標卡尺測量裸鼠移植瘤的大小。采用免疫組化檢測裸鼠移植瘤中Nrf2水平的變化。
　　結(jié)果：四種不同的非小細胞肺癌細胞株中HO-1表達水平存在差異，A549中HO-1表達最高，同時A549對EGCG最為耐受。二甲雙胍能抑制A549細胞中HO-1的蛋白水平，并且這種抑制效果存在濃度依賴性，0.4mmol/L的二

4、甲雙胍對 A549生長沒有抑制效果，但是能顯著抑制 HO-1的蛋白水平。0.4mmol/L的二甲雙胍能顯著增加EGCG對A549細胞的生長抑制，凋亡和ROS的水平。二甲雙胍能通過抑制Nrf2的細胞核分布降低HO-1的水平。最后通過分析基因芯片的結(jié)果發(fā)現(xiàn)相比于肺癌組織，正常肺上皮中HO-1水平明顯增高，且正常肺上皮BEAS-2B相比于A549對EGCG更為耐受。二甲雙胍能增加EGCG對A549裸鼠移植瘤的抑制作用。EGCG能增加裸鼠移植瘤

5、中Nrf2的水平，二甲雙胍抑制EGCG增加Nrf2的效應。
　　結(jié)論：本研究表明，二甲雙胍能抑制 A549細胞中HO-1的蛋白水平，并且能通過誘導凋亡和ROS的產(chǎn)生增加EGCG對A549生長的抑制。二甲雙胍能夠通過抑制細胞核內(nèi)的Nrf2水平減少HO-1的水平。此外，正常肺上皮和肺癌中 HO-1的表達存在差異，因此對 EGCG的敏感性不同。二甲雙胍聯(lián)合EGCG可以為臨床腫瘤治療提供了一個新方案。
　　第二部分：二甲雙胍對非小細

6、胞肺癌細胞A549細胞放射敏感性的影響和機制研究
　　目的：研究二甲雙胍對非小細胞肺癌 A549細胞放射敏感性的影響及其機制。
　　方法：采用克隆形成法檢測二甲雙胍和 X射線對 A549克隆形成的影響；采用 PI法檢測二甲雙胍和 X射線對 A549細胞周期的影響；采用細胞凋亡試劑盒檢測二甲雙胍和X射線對A549細胞凋亡的影響；分別采用Western Blot和免疫熒光檢測二甲雙胍和X射線對HO-1蛋白及Nrf2蛋白水平的影響

7、及對Nrf2在細胞內(nèi)亞分布的影響。
　　結(jié)果：二甲雙胍能抑制X射線對A549細胞克隆形成的抑制能力；二甲雙胍能抑制S期細胞的比例，同時減少X射線誘導的G2/M期阻滯；二甲雙胍能減少X射線導致的Nrf2細胞核轉(zhuǎn)位。
　　結(jié)論：本研究表明，二甲雙胍能增加X射線抑制A549細胞克隆形成的能力，并且能通過改變A549的細胞周期并減少X射線誘導的G2/M期阻滯。此外，二甲雙胍能夠通過抑制X射線誘導的Nrf2細胞核轉(zhuǎn)位抑制Nrf2信號通