聚醚類抗生素基因資源的挖掘.pdf

1、本文對(duì)聚醚類抗生素基因資源的挖掘進(jìn)行了研究。本研究分為三個(gè)部分：
　　 ⑴聚醚類抗生素基因資源的挖掘：聚醚類抗生素是由鏈霉菌產(chǎn)生的一類重要的聚酮類化合物，被廣泛的用于治療雞球蟲病(Coccidiosis)和作為牲畜飼料添加劑。它們的生物合成是經(jīng)過一個(gè)聚酮鏈的多烯前體，然后通過一系列后修飾反應(yīng)合成的。在這些后修飾反應(yīng)中，最關(guān)鍵的一步反應(yīng)是將多烯前體氧化成環(huán)氧鍵中間體，這一步反應(yīng)是由環(huán)氧化酶催化的，這個(gè)環(huán)氧化酶在聚醚類抗生素生物合成

2、基因簇中非常保守。為了快速定位聚醚類抗生素生物合成基因簇，我們利用這個(gè)保守的環(huán)氧化酶基因家族，通過序列比對(duì)，尋找出它們之間的共性，找出了一些關(guān)鍵的保守氨基酸，根據(jù)這些保守的氨基酸設(shè)計(jì)幾套簡(jiǎn)并引物，從中找出了一對(duì)基于PaBaLiS原理的效果最好的引物作為通用引物，從另外四個(gè)基因簇尚未被報(bào)道的聚醚類抗生素產(chǎn)生菌中成功篩選到了它們的環(huán)氧化酶基因，這些新篩選到的環(huán)氧化酶基因片段與已知的環(huán)氧化酶同源性高達(dá)50[％]～90[％]，另外我們還從正反向

3、引物比例角度優(yōu)化了簡(jiǎn)并引物篩選基因簇的方法。在比較了CODEHOP和PaBaLiS原理的基礎(chǔ)上，我們通過實(shí)驗(yàn)對(duì)CODEHOP原理作了適當(dāng)完善。
　　 ⑵鹽霉素基因簇的克隆：鹽霉素(Salinomycin)是在生產(chǎn)上已經(jīng)被廣泛應(yīng)用的抗生素。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的部分鹽霉素基因簇序列，我們成功篩選到了包括這段序列本身在內(nèi)的長(zhǎng)度為38000個(gè)堿基對(duì)的序列，但是經(jīng)對(duì)序列的分析發(fā)現(xiàn)，這部分序列可能并不是負(fù)責(zé)合成鹽霉素的。于是我們用在上面提到的依據(jù)

4、已知的環(huán)氧化酶序列并按照PaBaLiS原理設(shè)計(jì)的引物，重新從鹽霉素產(chǎn)生菌中篩選到另外一個(gè)可能是負(fù)責(zé)鹽霉素合成的基因簇，并證實(shí)這個(gè)新的基因簇與原來(lái)那個(gè)并沒有重疊，進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)還在進(jìn)行之中。
　　 ⑶拉沙里菌素基因簇的克?。豪忱锞?Lasalocid)是一個(gè)結(jié)構(gòu)比較特殊的聚醚類抗生素，對(duì)其基因簇的克隆和研究可以進(jìn)一步完善聚醚類抗生素的生物合成原理，在嘗試很多篩選方法都失敗以后，我們依據(jù)結(jié)構(gòu)域?；d體蛋白(AT)和酮基還原酶(KR