呋喃唑酮代謝物AOZ酶免疫分析方法研究.pdf

1、呋喃唑酮及其代謝物AOZ具有很強的毒性，易對人體健康造成危害，許多國家已將呋喃唑酮列為禁用藥物，且不能在動源性食品中檢測出呋喃唑酮及其代謝物AOZ。目前食品安全事件頻發(fā)，仍有不法商販繼續(xù)使用呋喃唑酮，呋喃唑酮在動物體內(nèi)迅速代謝為標志物AOZ，因此對畜禽產(chǎn)品中AOZ準確檢測顯得至關(guān)重要。目前AOZ殘留的檢測多采用儀器分析法，雖然準確性和靈敏度高，但是一般需要昂貴的大型儀器和專業(yè)技術(shù)人員，且檢測過程繁瑣，時間長，檢測成本高，使其無法滿足對樣

2、品大量快速篩查。因此，建立一種快速、靈敏的AOZ殘留檢測技術(shù)具有重要意義。本實驗建立了AOZ殘留檢測的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和化學(xué)酶免疫法(CLEIA)。
　　首先，要對AOZ進行衍生化，利用對醛基苯甲酸將AOZ衍生化為半抗原CPAOZ。然后利用活化酯法分別將CPAOZ與卵清蛋白(OVA)和辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)，合成包被原CPAOZ-OVA和酶標抗原CPAOZ-HRP。
　　其次，對包被抗原與抗體稀釋倍數(shù)、封閉

3、液、競爭時間、二抗稀釋倍數(shù)進行優(yōu)化，分別建立了AOZ間接競爭CLEIA法和間接競爭ELISA法。
　　然后，對包被抗體與酶標抗原稀釋倍數(shù)、封閉液、競爭時間進行優(yōu)化，分別建立了AOZ的直接競爭CLEIA法和直接競爭ELISA法。
　　最后對四種方法進行方法評估，結(jié)果表明，間接競爭CLEIA法的IC50值為0.74ng/mL，對牛肉、豬肉和雞肉的加標回收率為84.5％-97.8％，最低檢測限為0.028ug/kg。直接競爭CLE

4、IA法的IC50值為2.45ng/mL，對牛肉、豬肉和雞肉的加標回收率為83.9％-93.5％，最低檢測限為0.042ug/kg。間接競爭ELISA法的IC50值為1.096ng/mL，對牛肉、豬肉和雞肉的加標回收率為87.4％-102.7％，最低檢測限為0.225ug/kg。直接競爭ELISA法的IC50值為2.511ng/mL，對牛肉、豬肉和雞肉的加標回收率為84.5％-104.0％，最低檢測限為0.253ug/kg。四種方法除了對