免疫層析快速檢測(cè)呋喃唑酮代謝物的方法研究.pdf

1、免疫層析試紙條具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、方法簡(jiǎn)捷、分析容量大、檢測(cè)成本低等優(yōu)點(diǎn)，定性檢測(cè)不需要儀器輔助，且樣品前處理步驟簡(jiǎn)單方便，非常適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，并且可以提供系列化的產(chǎn)品以及技術(shù)產(chǎn)品可以商業(yè)化，不僅為檢測(cè)行業(yè)提供幫助，并能為社會(huì)創(chuàng)造經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
　　本課題研究設(shè)計(jì)了兩種免疫層析快速檢測(cè)試紙條，分別用金磁復(fù)合微粒和CdTe量子點(diǎn)代替膠體金標(biāo)記AOZ單抗，結(jié)合了納米標(biāo)記技術(shù)與免疫層析技術(shù)，通過(guò)金磁微球標(biāo)記和CdTe QDs熒光標(biāo)記抗體，

2、與同等膠體金標(biāo)記相比，提高了靈敏度，在定性分析中，前者可直接通過(guò)裸眼判斷，后者通過(guò)便攜式紫外燈照射，在定量分析中，前者可通過(guò)磁性號(hào)分析儀，后者通過(guò)熒光讀數(shù)儀可分別讀取層析載體上三維的磁性號(hào)和熒光信號(hào)，直接得到信號(hào)值，通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，定量檢測(cè)值。
　　本課題中制備了粒徑均一、分散性好的多層金磁復(fù)合微粒，并成功與AOZ單克隆抗體進(jìn)行偶聯(lián)，探索到最佳偶聯(lián)條件為:pH為7.4的環(huán)境下，1mg金磁復(fù)合微粒表面偶聯(lián)AOZ-McAb的最佳含量

3、為170μg，投入抗體含量480μg，偶聯(lián)率為35.43％，用含5％BSA，pH=7.4的Pbs的封閉劑封閉50min，最后探針保存于含0.2％BSA、2％蔗糖、0.8％Triton-Ⅹ-100、0.05％PVP、0.2％Tween-20、0.02％NaN3的Pbs中。可為其他抗體的磁微粒標(biāo)記提供參考。并對(duì)層析墊上材料進(jìn)行了優(yōu)選，包括硝酸纖維素膜、樣品墊和結(jié)合墊，分別選用Satorius CN140、GL-b02、Ahlstrom896

4、4;并對(duì)樣品墊及結(jié)合墊處理液進(jìn)行了探究實(shí)驗(yàn)，分別將含0.5％BSA、2％曲拉通、0.2％NaCl、2％PVP的超純水溶液作為最佳樣品墊處理液及含1％蔗糖、0.2％曲拉通、0.2％Tween-20的超純水溶液作為最佳結(jié)合墊處理液;將以上所得物成功組裝成AOZ金磁免疫層析試紙條，并對(duì)該試紙條的性能進(jìn)行了評(píng)估，該試紙條靈敏度為8ng/mL，與硝基呋喃類(lèi)代謝物無(wú)交叉反應(yīng)，特異性較好、重復(fù)性佳，常溫保存一年，4℃可保存長(zhǎng)達(dá)2年，穩(wěn)定性?xún)?yōu)良。

5、>　　本課題中制備了粒徑均一、分散性好，量子產(chǎn)率高達(dá)42.3％的高量子產(chǎn)率熒光CdTe QDs，具有良好的光譜性能的可作為標(biāo)記抗體的優(yōu)良熒光材料;優(yōu)選了量子點(diǎn)溶液的純化方案，即丙酮沉淀法優(yōu)于透析純化，對(duì)量子點(diǎn)的處理具有較高的參考價(jià)值;對(duì)熒光探針的偶聯(lián)條件進(jìn)行了優(yōu)化，選擇反應(yīng)50min作為CdTe-AOZ-McAb探針的最佳偶聯(lián)時(shí)間及AOZ-McAb最佳使用量為QDs與AOZ-McAb之比為1∶0.75。得到具有優(yōu)良光譜性能的熒光探針，為

6、其他熒光材料標(biāo)記抗體提供可行性偶聯(lián)方法參考;對(duì)層析墊上材料進(jìn)行了優(yōu)選，包括硝酸纖維素膜、樣品墊和結(jié)合墊，分別選用Millipore135、GL-b02、Ahlstrom8964。在以上條件下成功制得AOZ熒光免疫層析試紙條，并對(duì)該試紙條的性能進(jìn)行了評(píng)估，靈敏度為5ng/mL，與硝基呋喃類(lèi)代謝物沒(méi)有交叉反應(yīng)，特異性較好、重復(fù)性及穩(wěn)定性?xún)?yōu)良。
　　作為以上兩種試紙條的對(duì)比，本研究制備了AOZ金標(biāo)試紙條。采用最佳試紙條材料及處理方法處理