食品中呋喃唑酮代謝物酶免疫分析法的研究.pdf

1、當(dāng)前各種抗生素類獸藥在畜禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)中的使用仍具有廣泛性和必要性。硝基呋喃類藥物作為一種禁用獸藥，可用于治療動(dòng)物胃腸道疾病，目前在動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)仍有非法使用。硝基呋喃類藥物被動(dòng)物攝取后，能迅速代謝并長(zhǎng)期穩(wěn)定地以其代謝物形式存在于動(dòng)物體內(nèi)，其代謝物可引起慢性中毒，甚至具有致癌作用。因此，對(duì)于政府監(jiān)管部門和養(yǎng)殖企業(yè)來(lái)說(shuō)檢測(cè)畜禽肉類產(chǎn)品的硝基呋喃類藥物殘留有其必要性和重要性。呋喃唑酮作為一種硝基呋喃類藥物，通常時(shí)以其代謝物3-氨基-2-惡唑烷

2、酮（AOZ）作為標(biāo)示物來(lái)測(cè)定殘留量。目前檢測(cè)呋喃唑酮代謝物的方法可以歸結(jié)為儀器檢測(cè)法和快速檢測(cè)法，前者主要包括高效液相色譜法(HPLC)及其與質(zhì)譜聯(lián)用等技術(shù)，酶免疫方法主要包括酶聯(lián)免疫法（ELISA）、化學(xué)發(fā)光酶免疫法（CLEIA）、生物素-親和素放大酶免疫法（BA-ELISA）等。由于食品安全日常抽檢任務(wù)中檢樣量大，需要及時(shí)檢測(cè)，因此對(duì)于檢查速度慢、操作繁瑣的儀器分析法來(lái)說(shuō)難以實(shí)現(xiàn)上述要求，而操作簡(jiǎn)單快速的酶免疫方法在檢測(cè)藥物殘留方面

3、已廣泛應(yīng)用。本研究建立了動(dòng)物源食品中呋喃唑酮代謝物的酶聯(lián)免疫（ELISA）、生物素-親和素放大酶免疫（BA-ELISA）、化學(xué)發(fā)光酶免疫（CLEIA）等檢測(cè)方法。
　　首先，使用對(duì)醛基苯甲酸（4-CBA）把呋喃唑酮代謝物衍生為半抗原3-(4-羧基苯亞甲基)-氨基-2-惡唑烷酮（CPAOZ），再用活化酯法將卵清蛋白（OVA）和 CPAOZ連接成為CPAOZ-OVA，并對(duì)衍生后的CPAOZ用紅外光譜及核磁共振進(jìn)行鑒定，對(duì)合成的包被原進(jìn)

4、行紫外光譜掃描鑒定。
　　其次，優(yōu)化了三種酶免疫方法的主要條件。ELISA法的最優(yōu)條件是：包被原和單克隆抗體稀釋倍數(shù)分別為800倍和6400倍，封閉液是1％脫脂乳，競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間是60 min，HRP-IgG孵育時(shí)間是45 min，顯色時(shí)間是15 min；BA-ELISA最優(yōu)條件是：包被原和單克隆抗體的稀釋倍數(shù)分別為2000倍和6400倍，SA-HRP稀釋8000倍，封閉液是1%脫脂乳，競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間是30 min，Biotin-IgG孵育時(shí)

5、間是60 min，SA-HRP孵育時(shí)間是60 min，底物顯色時(shí)間是15 min；化學(xué)發(fā)光液A液是6 mmol/L對(duì)碘苯酚和10 mmol/L魯米諾溶液1:1（V/V）混合，B液是5 mmol/L過(guò)氧化氫脲溶液，A液與B液臨用前1:1（V/V）混勻；CLEIA法的優(yōu)化條件是：包被原和單克隆抗體稀釋倍數(shù)分別為4000倍和1600倍，1%脫脂乳封閉，競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間是30 min，HRP-IgG孵育時(shí)間是60 min。
　　最后，對(duì)三種酶免疫

6、法的靈敏度、特異性、精密度及準(zhǔn)確度進(jìn)行評(píng)價(jià)，并就準(zhǔn)確度指標(biāo)同國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中的液質(zhì)聯(lián)用法進(jìn)行對(duì)比分析。ELISA的線性方程是Y=-0.253X+1.336（R2=0.995），IC50是2.015 ng/mL，線性范圍是0.131~30.911 ng/mL，空白豬肉添加回收率是84.8%~90.3%，批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為3.3%~4.1%和4.6%~6.7%；BA-ELISA法的線性方程是Y=-0.267X+1.243(R2=0.999）

7、，IC50是0.606 ng/mL，線性范圍是0.046~8.061 ng/mL，回收率是88.4%~91.8%，批內(nèi)和批間 CV分別為2.7%~4.6%和4.8%~6.1%；CLEIA法的線性方程是Y=-0.357X+1.459（R2=0.984），IC50是0.486 ng/mL，線性范圍是0.070~3.362 ng/mL；回收率是89.3%~92.6%，批內(nèi)和批間CV分別為3.6%~4.8%和3.2%~5.1%。
　　結(jié)果