呋喃唑酮代謝物膠體金免疫層析試紙條的研制.pdf

1、橐簍夫?qū)W工程碩士專業(yè)學(xué)位論文呋喃唑酮代謝物膠體金免疫層析試紙條的研制PreparationofFUrazodoneMetabolitecolloidalgoldteststrip論文答辯日期：2Q里壘生旦魚旦呋喃唑酮代謝物膠體金免疫層析試紙條的研制摘要硝基呋喃類藥物是一類人工合成的抗生素，因價(jià)格低廉，被廣泛用于水產(chǎn)品的病害防治。硝基呋喃類藥物半衰期很短，在動(dòng)物體內(nèi)代謝迅速，且其代謝物可在機(jī)體內(nèi)穩(wěn)定存在。硝基呋喃類藥物的殘留嚴(yán)重威脅到人體

2、的健康，因此，世界各國均把硝基呋喃類藥物列為禁用漁藥。目前，用于檢測(cè)硝基呋喃類代謝物的常用方法為L(zhǎng)CMS／MS，但這種方法需要昂貴的儀器，且前處理復(fù)雜，成本高、分析時(shí)間又長(zhǎng)，不利于現(xiàn)場(chǎng)分析。而免疫層析分析法具有省時(shí)、高效、成本低等優(yōu)點(diǎn)，而且檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性好，非常適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和大批量篩查。本研究旨在研制出呋喃唑酮代謝物膠體金免疫層析試紙條，初步建立呋喃唑酮代謝物殘留的免疫層析快速檢測(cè)方法，為商用化試紙條的開發(fā)提供方法依據(jù)。首先實(shí)驗(yàn)對(duì)制備

3、膠體金的方法進(jìn)行了優(yōu)化，采用三種還原方法來制備膠體金，對(duì)比制備的膠體金性能參數(shù)，選擇最優(yōu)的還原方法。實(shí)驗(yàn)選擇檸檬酸三鈉還原制備膠體金，制備的膠體金粒徑為18nnl左右。利用上述方法制備的膠體金來標(biāo)記AOZ單克隆抗體，制備金標(biāo)探針，再將AOZ人工合成抗原(CPAOZBSA)和羊抗鼠二抗(IgG)分別包被在硝酸纖維素膜的T線和C線處，組裝成膠體金免疫層析試紙條。單抗的最佳標(biāo)記量為78“g／rnL，單抗標(biāo)記最佳的pH為90，抗原的最佳包被濃度

4、為10mg／mL，二抗的最佳包被濃度為10mg／mL，金標(biāo)抗體的最佳稀釋倍數(shù)為2倍稀釋，膠體金免疫層析試紙條的目測(cè)檢測(cè)限為80ng／mL。試驗(yàn)研究了幾種硝基呋喃類代謝物(AOZ)的結(jié)構(gòu)類似物對(duì)試紙條的特異性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：試紙條對(duì)SEM、CPSEM、AHD、CPAHD等均不發(fā)生交叉反應(yīng)性。試紙條檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性較高，適用于呋喃唑酮代謝物殘留的現(xiàn)場(chǎng)初步篩選，也為其他獸藥殘留試紙條的制備提供借鑒。關(guān)鍵詞：呋喃唑酮代謝物，膠體金，免疫