金黃色葡萄球菌膠體金免疫層析試紙條的研制.pdf

1、本文通過研究建立了一種針對金黃色葡萄球菌的膠體金免疫層析試紙條檢測方法，并通過雙納米金信號放大系統(tǒng)降低了檢測限，此方法被證明可用于快速檢測食品中的金黃色葡萄球菌。
　　通過誘導(dǎo)表達制得金黃色葡萄球菌的表面蛋白SdrD，將其作為抗原免疫新西蘭白兔獲得多克隆抗體，另一種抗體為鼠抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體。以雙抗夾心法的原理建立膠體金試紙條檢測方法，其中兔抗SdrD為檢測抗體，與納米金連接，鼠抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體作為捕獲抗體，噴涂

2、于NC膜T線的位置。
　　所使用的膠體金顆粒的粒徑為20 nm;金標抗體連接的最佳pH值為8.5、最適抗體量為24μg/mL;捕獲抗體的包被濃度為0.6 mg/mL，二抗、金標抗體稀釋倍數(shù)為1∶00和1∶5;選擇Millipore HF90s的硝酸纖維素膜作為固相載體;對NC膜采用濃度為2.5％BSA的PBS作為封閉處理液，封閉1h，對于金黃色葡萄球菌菌液的檢測限為1.57×106CFU/mL，與沙門氏菌、大腸O157∶H7、阪崎

3、腸桿菌、志賀氏菌不產(chǎn)生交叉反應(yīng)，10min得到檢測結(jié)果。檢測實際樣品，前增菌8h，對當豬肉、雞肉和牛奶中金黃色葡萄球菌的檢測限可達到2.34×10 CFU/g(mL)。
　　以粒徑為30nm的膠體金作為第二納米金探針，用其標記羊抗兔二抗，形成雙納米金信號放大系統(tǒng)?？山档蛡鹘y(tǒng)方法的檢出限，對金黃色葡萄球菌菌液的檢測限達到1.57×105 CFU/mL。在對實際樣品檢測時也縮短了增菌時間，前增菌6h，對當豬肉、雞肉和牛奶中金黃色葡萄球