呋喃它酮和呋喃妥因酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究.pdf

1、本論文對(duì)動(dòng)物源性食品中硝基呋喃類抗生素呋喃它酮和呋喃妥因及其代謝物的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法進(jìn)行了系統(tǒng)研究。
　　對(duì)于呋喃它酮，從其代謝物(AMOZ)出發(fā)，先將AMOZ與對(duì)醛基苯甲酸偶聯(lián)，衍生為CPAMOZ，然后利用活化酯法將其與牛血清蛋白偶聯(lián)制備免疫原，通過免疫新西蘭大耳白兔得到高特異性和高靈敏度的多克隆抗體。利用戊二醛法將AMOZ與雞卵白蛋白偶聯(lián)制備包被原。通過優(yōu)化包被抗原量、抗體稀釋倍數(shù)、封閉液、離子強(qiáng)度和緩沖液pH，建立了異源間接

2、競(jìng)爭(zhēng)ELISA。該方法對(duì)NPAMOZ的IC50為0.47±0.08ng/mL，檢出限(IC15)為0.04±0.008ng/mL。利用活化酯法將CPAMOZ和辣根過氧化物酶偶聯(lián)制備酶標(biāo)抗原。通過優(yōu)化抗體包被量、酶標(biāo)抗原稀釋倍數(shù)、封閉液、離子強(qiáng)度、緩沖液pH，建立了同源直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA。該方法對(duì)NPAMOZ的IC50為0.92±0.12ng/mL，檢出限(IC15)為0.1±0.08ng/mL。抗體具有很好的特異性，除對(duì)呋喃它酮原藥有交

3、叉反應(yīng)外，與其他硝基呋喃類藥物及其代謝物的均沒有交叉。
　　選擇雞肉、雞肝、牛肉、豬肉、蝦、鯛魚、木棉魚、魷魚樣品進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，樣品被分別添加了濃度為0.2ng/g、0.5ng/g、1.0ng/g、5.0ng/g的AMOZ，經(jīng)過過夜衍生后應(yīng)用所建立的ELISA方法檢測(cè)，回收率在74.3％-111.5％之間，且批內(nèi)和批間的變異系數(shù)（n=3）小于20％。對(duì)添加回收結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明所建立的ELISA方法針對(duì)不同類別的動(dòng)物組

4、織的檢測(cè)結(jié)果沒有顯著差異，方法具有很好的準(zhǔn)確性和廣泛的應(yīng)用性。
　　對(duì)于呋喃妥因從其代謝物(AHD)出發(fā)，先將AHD與對(duì)醛基苯甲酸偶聯(lián)，衍生為CPAHD，利用混合酸酐法與牛血清偶聯(lián)原制備免疫原，通過免疫新西蘭大耳白兔得到高特異性和高靈敏度的多克隆抗體。利用活化酯法將CPAHD和辣根過氧化物酶偶聯(lián)制備酶標(biāo)抗原，通過優(yōu)化抗體包被量、酶標(biāo)抗原稀釋倍數(shù)、封閉液、離子強(qiáng)度、緩沖液pH，建立了同源直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA。該方法對(duì)NPAHD的IC5

5、0為5.9±1.2ng/mL，檢出限(IC15)0.51±0.12ng/mL?？贵w具有很好的特異性，除對(duì)呋喃妥因原藥有交叉反應(yīng)外，與其他硝基呋喃類藥物及其代謝物的均沒有交叉。
　　選擇雞肉、牛肉、豬肉、蝦、木棉魚進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，樣品被分別添加了濃度為2.0ng/g、4.0ng/g、20ng/g、100ng/g的AHD，經(jīng)過過夜衍生后應(yīng)用所建立的ELISA方法檢測(cè)，回收率在71.7-104.1％之間，且批間和批內(nèi)變異系數(shù)(n=3)