重金屬鉛酶聯(lián)免疫檢測方法的研究.pdf

1、本論文對重金屬鉛的酶聯(lián)免疫檢測方法進行了系統(tǒng)的研究。采用雙功能螯合劑ITCBE將重金屬鉛離子與鑰孔嘁血藍(lán)蛋白(KLH)連接制得免疫原免疫兔子，免疫親和柱純化血清得到高效價和高特異性的重金屬鉛多克隆抗體。采用雙功能螯合劑ITCBE將重金屬鉛離子與牛血清蛋白(BSA)連接制得包被原，建立了一種間接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法，對影響實驗的各種因素（包被量、離子強度、pH值等）進行了優(yōu)化與研究，包被量0.1μg/well，離子強度為1mmol/L的P

2、BS，pH為7.5時所獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線靈敏度最高，穩(wěn)定性最好。本實驗所建立方法的靈敏度(IC50)為3.48μg/L，檢測限(IC15)為0.32μg/L。與其他金屬離子的交叉反應(yīng)率較低。
　　對自來水、海河水、中藥白芷、胡蘿卜、蝦蛄中的重金屬殘留進行了檢測。自來水直接與螯合劑ITCBE螯合后PBS稀釋5倍，海河水過0.22μm的水膜后再與螯合劑ITCBE螯合，PBS稀釋8倍，中藥白芷、胡蘿卜、蝦蛄則都將其烘干粉碎后采用強酸(濃硝酸

3、10mL，高氯酸2mL)浸泡并用高壓消解罐(160℃-180℃)硝化至溶液澄清，用Tris-HCl調(diào)節(jié)pH至中性，過0.22μm的水膜，用雙蒸水稀釋60倍，即可用于待測分析。添加3個不同濃度的重金屬鉛離子，回收率可達到78.5-121％。本實驗所建立的方法在自來水中的檢出限為1.6μg/L，在海河水中的檢出限為2.56μg/L，在其他樣品中的檢測限為19.2μg/kg。板內(nèi)變異和板間變異均小于16％。以上結(jié)果證明所建立的方法具有很高的準(zhǔn)