食品中新霉素獸藥殘留酶聯(lián)免疫檢測方法研究.pdf

1、本論文對獸藥新霉素的酶聯(lián)免疫分析方法進行了研究。采用碳化二亞胺法(EDC)將新霉素與匙孔血藍蛋白(KLH)連接制得免疫原免疫兔子,制備出高效價和高特異性的新霉素多克隆抗體。采用碳化二亞胺法(EDC)與辣根過氧化物酶連接制得酶標抗原,建立了一種高靈敏度直接競爭ELISA檢測方法,IC50為1.0±0.2μg/L,溶液中的最低檢測限(IC15)為0.1±0.01μg/L,低于以往關(guān)于新霉素直接競爭ELISA分析方法的報道,并對方法的精密度進

2、行了考察,板內(nèi)變異和板間變異的變異系數(shù)均低于20％。由于新霉素在畜牧業(yè)生產(chǎn)中廣為使用,因此在動物源性食品中殘留較多,故將所建立的方法應用于所選取的牛奶、豬肉、魚肉、雞肉、雞蛋和豬腎六種樣品中新霉素殘留的快速檢測,詳細考查了不同樣品基質(zhì)對ELISA方法的影響及其去除方法,新霉素的最低檢出限均低于最低殘留限量(500 μg/kg或μg/L),分別對新霉素在六種實際樣品中的添加回收率進行實驗,回收率平均可達到75％～105％,可滿足國標檢測方

3、法對檢測靈敏度的要求,也可滿足快速篩選方法的要求。
　　 因為新霉素無發(fā)色團,在紫外和熒光條件下無法被檢測到,故需采用衍生的方法。選擇鄰苯二甲醛和巰基乙醇對新霉素進行衍生,研究了衍生反應的試驗條件,建立了檢測動物源性樣品中新霉素殘留的高效液相色譜檢測方法,采用液相色譜法對建立的新霉素直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法的準確性進行了驗證。兩種方法檢測結(jié)果的一致性很高,線性相關(guān)系數(shù)R2值在0.9以上。
　　 進一步對新霉素抗體和酶標抗