食品中5-羥甲基糠醛酶聯(lián)免疫檢測方法研究.pdf

1、5-羥甲基糠醛是食品中由還原糖經(jīng)酸催化降解或通過美拉德反應(yīng)而形成的一種物質(zhì)。至今為止，雖然5-羥甲基糠醛的毒性仍處于爭議過程中，但是它的含量經(jīng)常作為衡量碳水化合物含量豐富的食品在經(jīng)過熱處理或貯存時(shí)間長時(shí)質(zhì)量破壞程度的一個(gè)指標(biāo)。所以食品中5-羥甲基糠醛的檢測方法仍然受到人們的普遍關(guān)注。為了便于分析檢測食品中的5-羥甲基糠醛，本文建立了一種具有高靈敏度和高特異性的酶聯(lián)免疫方法(ELISA)。
　　為了得到針對5-羥甲基糠醛有特異性的抗

2、體，本研究分別利用5-羥甲基糠醛與琥珀酸酐，一代樹狀分子，二代樹狀分子和對苯二甲酸反應(yīng)得到四種不同的半抗原，并與載體蛋白BSA和KLH結(jié)合制備了七種免疫原分別免疫新西蘭大白兔，然后選出對于5-羥甲基糠醛特異性最強(qiáng)的抗血清，用ProteinA-Sepharose4B蛋白親和柱純化后得到特異性的抗體。為了檢測實(shí)際樣品中5-羥甲基糠醛的含量，必須研究具有好的靈敏度和450nm波長下合適吸光度值（最大吸光度值為1左右）的ELISA分析條件。經(jīng)過

3、優(yōu)化酶標(biāo)抗原稀釋倍數(shù)，抗體包被量，緩沖溶液pH，離子強(qiáng)度及封閉液五項(xiàng)參數(shù)，得到ELISA方法工作的最佳條件，并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。該方法的靈敏度(IC50)和檢出限(IC15)分別是0.15±0.012mg/L和0.02±0.002mg/L。
　　本研究通過對樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化，消除了樣品基質(zhì)影響，得到一套簡單可行的樣品處理方法。并將建立的方法應(yīng)用于焙烤食品法式小面包，薯片，法式軟面包和麥香雞塊中5-羥甲基糠醛的檢測，樣品檢出限是1-