影響酒石酸泰萬菌素口服生物利用度因素的初步研究.pdf

1、為探討影響酒石酸泰萬菌素口服生物利用度的因素，本研究采用雞肝原代細(xì)胞模型、Caco-2細(xì)胞模型和小腸灌流模型，體外研究酒石酸泰萬菌素代謝消除和吸收轉(zhuǎn)運(yùn)。并通過抑制CYP3A和P-gp，考察其對酒石酸泰萬菌素在AA肉雞體內(nèi)的藥動學(xué)影響。具體分為以下幾個部分:
　　1.酒石酸泰萬菌素生物利用度的研究
　　為了研究酒石酸泰萬菌素的口服生物利用度，建立了血漿、培養(yǎng)基和緩沖液中酒石酸泰萬菌素的處理及高效液相(HPLC)色譜分析方法。1

2、日齡的AA肉雞飼喂至28日齡后，挑選20只健康雄性肉雞，分為口服和靜脈給藥兩組，每組10只，分別灌服和靜注10 mg·kg-1.b.w的酒石酸泰萬菌素溶液。給藥后24 h內(nèi)，翅下靜脈采血，用HPLC法測定酒石酸泰萬菌素血藥濃度，用3P97藥動學(xué)軟件分析藥-時數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，建立的HPLC方法符合定量檢測要求。肉雞單劑量口服和靜注酒石酸泰萬菌素的藥動學(xué)過程符合二室開放模型。口服后血漿中泰萬菌素的藥時曲線下面積(AUC)為0.82μg·mL

3、-1·h，達(dá)峰時間(Tmax)0.72 h;靜注后血漿中泰萬菌素的藥時曲線下面積(AUC)為6.47μg·mL-1·h。結(jié)果表明，酒石酸泰萬菌素口服后，吸收迅速，但口服生物利用度(F)低，僅有12.67％。
　　2.影響酒石酸泰萬菌素口服生物利用度部位的定量研究
　　1日齡的AA肉雞飼喂至42日齡后，挑選40只健康雄性肉雞，隨機(jī)分為口服給藥組、十二指腸給藥組、門靜脈給藥組和靜脈給藥組，每組10只。肉雞麻醉后，以10 mg·k

4、g-1劑量按以上給藥方式給予酒石酸泰萬菌素溶液。給藥后24 h內(nèi)，翅下靜脈采血，用HPLC法測定酒石酸泰萬菌素血藥濃度，用3P97藥動學(xué)軟件分析藥-時數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，不同途徑給藥后，酒石酸秦萬菌素的藥動學(xué)過程符合二室開放動力學(xué)模型。靜脈給藥組的曲線下面積(AUC)顯著高于門靜脈給藥組;靜脈和門靜脈給藥組都顯著高于口服給藥組。結(jié)果表明，酒石酸泰萬菌素的口服生物利用度主要受腸道和肝臟影響。腸道影響最大，達(dá)87.2‰其次為肝臟，達(dá)16.2％。

5、
　　3.酒石酸泰萬菌素代謝消除和吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的體外研究
　　利用肝原代細(xì)胞體外代謝模型、Caco-2單層細(xì)胞體外轉(zhuǎn)運(yùn)模型和腸道灌流模型，分別研究酒石酸泰萬菌素的體外代謝消除和體外吸收轉(zhuǎn)運(yùn)。利用肝原代細(xì)胞體外代謝模型，以不同濃度的酒石酸泰萬菌素考察代謝消除，并抑制CYP1A和CYP3A活性，考察它們對酒石酸泰萬菌素代謝的影響;運(yùn)用Caco-2單層細(xì)胞體外轉(zhuǎn)運(yùn)模型研究酒石酸泰萬菌素吸收特點(diǎn)，同時考察P-gp對其轉(zhuǎn)運(yùn)的影響;運(yùn)用腸道

6、灌流模型，添加EGTA和抑制P-gp，分別對十二指腸、空腸和回腸進(jìn)行單向灌流，考察酒石酸泰萬菌素吸收的主要腸段和P-gp對酒石酸泰萬菌素轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。結(jié)果顯示，酒石酸泰萬菌素在肝細(xì)胞中存在著代謝消除，而且有時間依賴性和濃度依賴性，符合酶促動力學(xué)特征。CYP3A被抑制后，酒石酸泰萬菌素代謝消除顯著減慢。Caco-2細(xì)胞中，轉(zhuǎn)運(yùn)呈現(xiàn)細(xì)胞旁轉(zhuǎn)運(yùn)扣跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)并存;EGTA的存在會使轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)增加;存在P-gp介導(dǎo)的外排現(xiàn)象。而在小腸灌流過程中，十二

7、指腸吸收迅速，是主要吸收腸段，吸收方式以跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)為主;EGTA的存在難以提高吸收效率，維拉帕米的存在可以顯著降低P-gp介導(dǎo)的外排;各腸段的轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)說明在十二指腸吸收良好，空腸和回腸的吸收較差。結(jié)果表明，CYP3A參與了酒石酸泰萬菌素的代謝消除，由它引起的首過效應(yīng)會使酒石酸泰萬菌素的口服生物利用度降低，另外，腸道的吸收不良、P-gp介導(dǎo)的外排及在腸系膜中的代謝也是酒石酸泰萬菌素口服生物利用度低的原因。
　　4.CYP3A以及P-

8、gp對酒石酸泰萬菌素在AA肉雞體內(nèi)的藥動學(xué)影響
　　1日齡的AA肉雞飼喂至42日齡后，挑選60只健康雄性肉雞，隨機(jī)分為酮康唑處理組、維拉帕米處理組以及對照組，每組20只。酮康唑處理組按照60 mg·kg-1.b.w的劑量給動物灌服酮康唑，1天1次，第3天灌藥0.5h后，按10 mg·kg-1.b.w灌服和靜注酒石酸泰萬菌素溶液;其它兩組分別連續(xù)灌服9 mg·kg-1.b.w的維拉帕米和相同體積的生理鹽水，第3天灌藥0.5 h后，按

9、10 mg·kg-1.b.w灌服和靜注酒石酸泰萬菌素溶液。給藥后24 h內(nèi)，翅下靜脈采血，用HPLC法測定酒石酸泰萬菌素血藥濃度，用3P97藥動學(xué)軟件分析藥-時數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，肉雞以單劑量口服和靜注酒石酸泰萬菌素的藥動學(xué)過程符合二室開放動力學(xué)模型?？诜o藥后對照組的藥-時曲線下面積(AUC)為0.96μg·mL-1·h，表觀清除率（CL/F)為15.3 L·kg-1·h-1;肉雞體內(nèi)CYP3A活性被酮康唑特異性抑制后，血漿中泰萬菌素的藥