重組大腸桿菌酒石酸脫氫酶β亞基體外分子交聯(lián)的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、  本實(shí)驗(yàn)以大腸桿菌酒石酸脫氫酶β亞基(TtdB)為研究材料,探索了其在體外的交聯(lián)情況。首先利用PCR技術(shù)從大腸桿菌BL21中獲取TtdB基因,克隆到PGM-T載體并測序;序列測定無誤后連接到表達(dá)載體pTrcHisC,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。重組蛋白以包含體形式存在,應(yīng)用TALON固定化金屬親和樹脂以變性的方法純化,通過分步透析逐步去除變性劑的方法復(fù)性,復(fù)性率可達(dá)70﹪。將復(fù)性后的蛋白與溶菌酶通過熱誘導(dǎo)去折疊和氧化重折疊方法進(jìn)行體外蛋白質(zhì)分子

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