重組大腸桿菌生產(chǎn)腸激酶的研究.pdf

1、本文對重組大腸桿菌生產(chǎn)腸激酶進行了研究。文章成功的構建了兩株牛腸激酶輕鏈(sBEKLC)基因工程菌(BL21(DE3)/pET39-sBEKLC1KX和BL21(DE3)/pET39-sBEKLC1SX)。根據(jù)其構建特點，考察了利用金屬螯合層析法和滲透沖擊法提取sBEKLC，結(jié)果顯示，利用滲透沖擊法得到了具有較強生物活性的sBEKLC粗酶液，而破胞后通過金屬螯和層析得到的sBEKLC融合蛋白沒有顯示生物活性。進一步考察了IPTG、誘導溫

2、度和表達時間等條件對sBEKLC表達的影響。結(jié)果表明在優(yōu)化條件下，菌株BL21(DE3)/pET39-sBEKLC1SX在IPTG為0.1mM，誘導溫度為26℃，誘導培養(yǎng)8個小時時活性最高，BL21(DE3)/pET39-sBEKLC1KX則當IPTG為0.2mM，誘導溫度為26℃，誘導培養(yǎng)8個小時時活性達到最高。對滲透沖擊所得到的粗酶液，進行精制，得到了電泳純度在95％以上的sBEKLC1SX。5ng EKLC經(jīng)過16h能將20ug的