M2型丙酮酸激酶在早孕小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá).pdf

1、目的：成功的胚胎植入是正常妊娠的先決條件。胚泡植入子宮內(nèi)膜的過程涉及多種激素、細(xì)胞因子、粘附分子、免疫系統(tǒng)等的協(xié)同作用，與代謝途徑也密切相關(guān)。糖代謝是三大物質(zhì)代謝中重要組成部分，組織細(xì)胞在有氧條件下進(jìn)行糖酵解的現(xiàn)象稱為瓦氏效應(yīng)(Warburg effect)。M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2，Pkm2)是糖酵解過程中一個(gè)標(biāo)志性的代謝酶，在糖酵解過程中發(fā)揮重要作用。已有研究表明在早孕小鼠子宮內(nèi)膜蛻膜化過程中存在有氧糖

2、酵解這一特殊現(xiàn)象，課題組前期基因芯片篩查結(jié)果初步顯示Pkm2在早孕D5小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)呈現(xiàn)著床點(diǎn)高于著床旁的趨勢(shì)。但是，Pkm2在早孕小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)規(guī)律、與子宮內(nèi)膜蛻膜化的關(guān)系并不清楚。因此，本研究初步探討Pkm2在早孕小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)規(guī)律，為后續(xù)進(jìn)一步探討其在早孕小鼠子宮內(nèi)膜中的作用提供依據(jù)。
　　方法：
　　（1）建立正常妊娠小鼠模型，分別收集孕D1、D4、D5、D6、D7小鼠子宮內(nèi)膜組織，采用Real-time

3、 PCR、免疫印跡法和免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)Pkm2在早孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)規(guī)律。
　?。?）建立假孕小鼠模型，分別收集假孕PD1、PD4、PD5、PD6、PD7天小鼠子宮內(nèi)膜組織，采用Real-time PCR、免疫印跡法和免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)Pkm2在假孕小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)規(guī)律。
　　（3）建立體內(nèi)人工誘導(dǎo)蛻膜化模型，分別收集誘導(dǎo)側(cè)和未誘導(dǎo)側(cè)小鼠子宮，采用Real-time PCR、免疫印跡法和免疫組織化學(xué)方法，檢

4、測(cè)Pkm2在誘導(dǎo)側(cè)和未誘導(dǎo)側(cè)子宮內(nèi)膜的表達(dá)。
　?。?）建立體外人工誘導(dǎo)蛻膜化模型，分離原代小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，采用雌、孕激素對(duì)分離的原代小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)蛻膜化。采用免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞Vimentin蛋白表達(dá)的方法鑒定分離的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞純度，采用Real-time PCR、免疫印跡法方法檢測(cè)Pkm2在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)蛻膜化后及未誘導(dǎo)蛻膜化子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　?。?）在早孕小鼠子宮內(nèi)膜

5、組織中，Pkm2 mRNA及蛋白的表達(dá)在孕D6達(dá)到高峰，孕D6和孕D7的表達(dá)明顯高于孕D1；孕D5、D6、D7天著床點(diǎn)子宮內(nèi)膜Pkm2 mRNA和蛋白的表達(dá)均顯著高于著床旁子宮內(nèi)膜；在孕D1、D4 Pkm2蛋白主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜的腔上皮和腺上皮，部分基質(zhì)細(xì)胞也有表達(dá)；孕D5、D6、D7著床旁子宮內(nèi)膜，Pkm2蛋白在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞、腺上皮和腔上皮均有表達(dá)，且隨著妊娠天數(shù)的增加表達(dá)有逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)；孕D5、D6、D7著床點(diǎn)子宮內(nèi)膜，Pkm

6、2蛋白主要表達(dá)于胚胎和蛻膜區(qū)，腔上皮未見明顯表達(dá)。
　?。?）在假孕小鼠子宮內(nèi)膜組織中，Pkm2 mRNA從假孕PD6開始有明顯增強(qiáng)，PD6與PD7的表達(dá)相當(dāng)，且表達(dá)量明顯高于PD1；Pkm2蛋白的表達(dá)每組間無顯著差異；PD1 Pkm2蛋白主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮，基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)較少，PD5、PD6、PD7 Pkm2蛋白主要在子宮內(nèi)膜的腺上皮表達(dá)，腔上皮及基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)減少。
　?。?）在體內(nèi)人工誘導(dǎo)蛻膜化模型中，Pkm

7、2 mRNA及蛋白的表達(dá)在誘導(dǎo)側(cè)子宮內(nèi)膜的表達(dá)明顯高于未誘導(dǎo)側(cè)；Pkm2蛋白在誘導(dǎo)側(cè)子宮內(nèi)膜廣泛表達(dá)，在未誘導(dǎo)側(cè)子宮內(nèi)膜主要表達(dá)于腔上皮和腺上皮，少量表達(dá)于基質(zhì)細(xì)胞。
　?。?）分離培養(yǎng)小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，并用E2+P4誘導(dǎo)其發(fā)生蛻膜化，Pkm2 mRNA及蛋白在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)蛻膜化后的表達(dá)明顯高于未誘導(dǎo)蛻膜化的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　?。?）Pkm2在早孕小鼠子宮內(nèi)膜呈規(guī)律表達(dá)。
　　（