TACE在動情周期和早孕小鼠子宮內(nèi)膜的表達及作用研究.pdf

1、胚胎植入是人類和哺乳動物生殖過程中妊娠建立的第一步，也是決定妊娠成功與否的關(guān)鍵。成功的植入取決于處于接受狀態(tài)的子宮內(nèi)膜和具有侵入性的胚泡間的同步協(xié)調(diào)反應(yīng)。但子宮內(nèi)膜僅在某一特定時期允許胚胎植入，這一時期時間很短，代表著子宮內(nèi)膜對胚泡具有容受性，稱為“著床窗”。胚胎植入過程包括胚泡脫去透明帶、定位、黏附、侵入到最后植入等幾個階段，涉及到眾多基因的調(diào)控以及錯綜復(fù)雜的調(diào)節(jié)因子網(wǎng)絡(luò)的參與。腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶(TACE)因其能水解細(xì)胞膜上的膜型

2、腫瘤壞死因子(TNFα)而得名[1]。TACE基因約50kb，包括19個外顯子，定位在小鼠的第12號染色體，人的第2號染色體(2p25)上[2，3]。TACE屬于膜結(jié)合糖蛋白家族，即解整合素-金屬蛋白酶(a disintegrin and metalloprotease，ADAM)家族，又歸入鋅離子結(jié)合蛋白超家族。TACE是多結(jié)構(gòu)域的I型跨膜蛋白，開放閱讀框編碼824個氨基酸。它具有ADAM家族的共有序列：信號肽，前肽，金屬蛋白酶區(qū)，解

3、整合素區(qū)，富半胱氨酸區(qū)，跨膜區(qū)和胞漿區(qū)[4,5]。可水解多種細(xì)胞表面結(jié)合因子，參與細(xì)胞黏連、融合、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等一系列過程。最近研究表明，TACE在人子宮內(nèi)膜上皮接受期有表達[6]。且最近發(fā)現(xiàn)，TACE在一半以上的乳腺腫瘤、絕大多數(shù)腎細(xì)胞癌及肝細(xì)胞癌、前列腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌中高表達[7，8]。目前認(rèn)為胚胎植入過程與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程極為相似，故推測TACE基因在胚胎植入過程中有類似作用。然而TACE基因在小鼠子宮內(nèi)膜的表達規(guī)律國內(nèi)外尚無文

4、獻報道，是一個值得研究的課題。 目的：研究TACE基因在動情周期及早孕期小鼠子宮內(nèi)膜的表達及其對胚胎植入的影響，初步探討它在小鼠生殖中的作用。 方法： 1.收集動情周期各期和早孕d1～d7小鼠子宮內(nèi)膜，共11組，每組10只小鼠。運用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)測定FACEmRNA的表達情況； 2.收集動情周期各期和早孕d1～d7小鼠子宮送作切片，共11組，每組10只小鼠。運用免疫組織化學(xué)SP法檢

5、測小鼠子宮內(nèi)膜中TACE蛋白的表達情況； 3.體內(nèi)實驗：于孕d3小鼠單側(cè)子宮角注射TACE抗體或生理鹽水，每組6只，于孕d9觀察植入的胚胎數(shù)。 結(jié)果： 1.RT-PCR：動情周期及早孕期小鼠子宮內(nèi)膜均有TACEmRNA表達。動情周期中動情期表達較強，與其它3期相比有顯著性差異(P＜0.01)； 其它3期表達較弱，之間無顯著性差異。妊娠期子宮內(nèi)膜組織TACEmRNA的表達顯著高于未孕動情期(P＜0.05)，

6、且隨著妊娠天數(shù)的增加呈現(xiàn)逐漸增強的趨勢，到妊娠d4達高峰，以后漸降。 2.免疫組織化學(xué)：TACE蛋白在動情周期及早孕期d1～d7小鼠子宮內(nèi)膜均有表達。主要分布于腔上皮和腺上皮胞漿及頂端面。妊娠d3、d4、d5、d6伴隨著基質(zhì)細(xì)胞的表達。TACE蛋白的表達規(guī)律與mRNA結(jié)果基本一致。 3.體內(nèi)實驗：孕d9剖腹檢查發(fā)現(xiàn)，注射抗體側(cè)子宮角植入胚胎數(shù)顯著低于注射生理鹽水的假試驗對照組，且自身對照試驗中，注射抗體側(cè)子宮角胚胎著床