mTOR在早孕小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)規(guī)律及意義.pdf

1、目的： 本研究運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQ-PCR)、原位雜交法、Western印跡法及免疫組織化學(xué)(IHC)技術(shù)，檢測早孕小鼠不同時(shí)間段子宮內(nèi)膜mTOR基因表達(dá)變化，有助于從分子水平探討mTOR在胚胎正常著床過程中的分子調(diào)控機(jī)制，為了解人類正常生殖過程機(jī)制和生殖方面疾病的診斷、治療奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.建立NIH小鼠妊娠動物模型，隨機(jī)將孕鼠分為5組作為實(shí)驗(yàn)組，未孕小鼠作為對照組，另設(shè)一假孕組，分離未孕和孕d3

2、、d4、d5、d6、d7、假孕小鼠的子宮內(nèi)膜組織，分別于-80℃凍存?zhèn)溆谩?2.用FQ-PCR和原位雜交法定量、定位檢測mTOR在早孕小鼠不同時(shí)間段子宮內(nèi)膜組織中mRNA的表達(dá)水平。 3.用Western印跡法和IHC技術(shù)半定量、定位檢測mTOR在早孕小鼠不同時(shí)間段子宮內(nèi)膜組織中蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1.FQ-PCR分析表明，妊娠子宮內(nèi)膜組織mTOR mRNA的表達(dá)較未妊娠的子宮內(nèi)膜組織顯著增加(P＜

3、0.05)；妊娠d3時(shí)mTOR.mRNA表達(dá)增強(qiáng)，d4、d5表達(dá)到高峰，d6、d7表達(dá)迅速下降：且著床窗期(d4，d5)表達(dá)與其他妊娠各組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；假孕組表達(dá)稍高于未孕組，但差異不顯著。 2.Western 印跡法分析顯示，mTOR的蛋白質(zhì)表達(dá)變化趨勢與FQ-PCR結(jié)果基本一致。 3.原位雜交和IHC分析顯示mTOR mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)主要在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，與上皮細(xì)胞各組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

4、0.05)；其表達(dá)變化趨勢與FQ-PCR和Western印跡法結(jié)果一致。 結(jié)論： 1.本研究結(jié)果顯示早孕小鼠子宮內(nèi)膜組織中mTOR基因表達(dá)較非妊娠的子宮內(nèi)膜組織明顯升高，提示mTOR對于子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞的生長、增殖和分化具有重要意義。 2.mTOR表達(dá)量從著床前期至著床窗期逐漸增高，且著床窗期d4、d5達(dá)高峰，提示其作用是以mTOR為中心調(diào)控點(diǎn)，增強(qiáng)促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、能量釋放的信號通路的活性，為促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞快速

5、生長、增殖和分化提供能量和物質(zhì)支持。 3.在胚胎著床后，d6、d7這一時(shí)期mTOR的表達(dá)與著床窗期相比迅速降低，提示mTOR的下調(diào)使著床后的子宮內(nèi)膜細(xì)胞生長和增殖減緩，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，有助于通過子宮內(nèi)膜容受狀態(tài)的改變來適應(yīng)胚胎著床。 4.mTOR表達(dá)主要集中在早孕小鼠不同時(shí)間段的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，提示mTOR與早期妊娠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的生長、增殖、分化和凋亡密切相關(guān)。 5.同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)假孕組mTOR的表達(dá)量稍高