Cyclin-E在早孕小鼠子宮內(nèi)膜的表達及功能研究.pdf

1、著床(implantation)是指胚胎通過與子宮內(nèi)膜的相互作用而侵入子宮內(nèi)膜的過程，是一個復雜而重要的生命活動。它是人類和哺乳動物生殖過程中妊娠建立的第一步，也是決定妊娠成功與否的關(guān)鍵。成功的植入取決于處于容受狀態(tài)的子宮內(nèi)膜和具有侵入性的胚胎間的同步反應。子宮內(nèi)膜僅在某一特定時期允許胚胎著床，這一時期時間很短，代表著子宮內(nèi)膜對胚胎具有容受性，稱為“著床窗”。由于涉及到眾多基因的調(diào)控以及錯綜復雜的調(diào)節(jié)因子網(wǎng)絡(luò)的參與，早期的胚胎發(fā)育和著床

2、的分子機制尚不完全明了。有研究表明，胚胎著床和腫瘤轉(zhuǎn)移在細胞的遷移、侵入等方面的生物學行為驚人的相似，不少在腫瘤中發(fā)揮作用的原癌基因和抑癌基因在胚胎著床過程中也發(fā)揮了作用。因此，原癌基因和腫瘤抑制基因也成為了胚胎著床機制研究的熱點。作為癌基因之一的細胞周期蛋白家族(Cyclins)是調(diào)節(jié)細胞增殖的一類重要調(diào)控因子，在胚胎著床過程中的作用引起我們的關(guān)注。 Cyclin-E為G1期細胞周期素，是一類核蛋白℃yclin-E gene定

3、位于人類染色體19q12-13，有4個外顯子及3個內(nèi)含子，編碼由395個氨基酸組成的蛋白，分子量約5×10kD，已知有一個大約87個氨基酸的高度保守中心區(qū)，通常被稱作周期蛋白盒(Cyclin box)，這一蛋白盒在各物種中保留，且可與CDK結(jié)合℃yclin-E表達升高始于G1中期，至G1晚期的G1/S交界處達高峰，之后隨細胞進入S期開始下降，到G2/M期降為零[1]。韋毓[2]等的研究表明Cyclin-E在正常子宮內(nèi)膜中呈陰性表達。Re

4、ese J[3]等利用基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)Cyclin-E在妊娠小鼠胚胎著床點呈高表達，提示Cyclin-E可能是胚胎著床的調(diào)控因子。然而Cyclin-E在小鼠妊娠早期子宮內(nèi)膜中的表達規(guī)律國內(nèi)外尚無文獻報道，是一個值得研究的課題。 目的：通過對細胞周期素E(Cyclin-E)在早孕小鼠子宮內(nèi)膜表達的規(guī)律性變化及其對胚胎植入的影響，初步探討它在小鼠胚胎著床過程中的作用方法： 1. 收集早孕1～7天小鼠的子宮內(nèi)膜，共7組(分別記

5、為D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7)，每組10只，提取內(nèi)膜RNA，運用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術(shù)測定Cyclin-EmRNA在早孕小鼠的子宮內(nèi)膜中的表達規(guī)律； 2. 收集早孕1～7天小鼠子宮，共7組，每組4只，運用免疫組織化學SP法檢測早孕小鼠子宮內(nèi)膜中Cyclin-E蛋白的表達情況； 3. 于小鼠孕3天晚8時實驗組一側(cè)子宮角注射抗Cyclin-E抗體，另一側(cè)注射等體積生理鹽水；對照組只一側(cè)注射生理鹽

6、水。于孕8天觀察著床胚胎數(shù)。 結(jié)果： 1.RT-PCR：妊娠第1～7天小鼠子宮內(nèi)膜組織均有Cyclin-E表達，自妊娠D2起隨妊娠天數(shù)的增加表達呈逐漸升高趨勢，到妊娠D5表達量達峰值，D6開始下降，但仍維持在一較高水平(表達量大于D1)。其中妊娠D5表達量最高，與其余各組比較差異顯著(p＜0.05)。 2.免疫組織化學：Cyclin-E蛋白在妊娠第1～7天小鼠子宮內(nèi)膜均有表達，陽性著色部位在細胞核。D1內(nèi)膜腺上皮有少量陽

7、性表達；D2則主要定位于內(nèi)膜腺上皮和腔上皮；D3-5內(nèi)膜腺上皮、腔上皮及內(nèi)膜基質(zhì)均有表達，并隨妊娠天數(shù)增加而表達量增多；D6基質(zhì)的陽性表達開始減弱，而腺上皮及腔上皮陽性表達仍較強；D7僅腔上皮少量表達。Cyclin-E蛋白的表達規(guī)律與mRNA的表達規(guī)律基本相符。 3.子宮角注射抗Cyclin-E抗體，與對照組(注射等體積生理鹽水)相比胚胎著床數(shù)明顯減少(p＜0.05)。 結(jié)論： Cyclin-E在著床窗口期(妊娠