環(huán)孢素A下調(diào)腫瘤特異性M2型丙酮酸激酶并抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖.pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文環(huán)孢素A下調(diào)腫瘤特異性M2型丙酮酸激酶并抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖姓名：姜?jiǎng)P申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：王青青20091201浙江人學(xué)碩1j學(xué)位論文中文摘要M2，L和R)，PKM2是一種胚胎表型，它在分化過程中逐步被其他表型代替，但當(dāng)成熟組織細(xì)胞從靜息期重新進(jìn)入細(xì)胞周期時(shí)，這些組織特異性丙酮酸激酶(PKMI，PKL，PKR)將被PKM2代替。腫瘤的發(fā)生是體細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期并無限增殖的過程，在這個(gè)過程中

2、PKM2大量表達(dá)代替原來的丙酮酸激酶正常表型，以維持其自身的高度增殖。研究表明(包括最近Nature上報(bào)道)，PKM2在腫瘤的異常代謝及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。PKM2是一種有較好應(yīng)用價(jià)值的腫瘤診斷以及療效預(yù)后評(píng)價(jià)的標(biāo)志物，也可能成為重要的抗腫瘤藥物的靶點(diǎn)。在本研究中，我們首次發(fā)現(xiàn)了CsA能顯著下調(diào)乳腺癌細(xì)胞中腫瘤特異性M2型丙酮酸激酶(PKM2)的表達(dá)和活性，從而抑制乳腺腫瘤細(xì)胞的體外增殖和生長，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生壞死，提

3、示了CsA在乳腺癌的輔助治療中可能具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。本研究分為兩部分：第一部分：CsA抑制乳腺癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞壞死用不同濃度CsA(5，lo，15，20ktg／m1)處理乳腺癌細(xì)胞株MCF一7，MDAMB435，MDAMB一231和正常乳腺原代細(xì)胞，MTT法檢測這些細(xì)胞的體外生長，結(jié)果顯示CsA可以劑量和時(shí)問依賴方式抑制乳腺癌細(xì)胞的體外生長，其抑制效應(yīng)明顯高于對(duì)正常原代乳腺細(xì)胞的作用。CsA處理MCF7細(xì)胞后，MCF一7中Gl期細(xì)

4、胞明顯增多，而進(jìn)入S期的減少，細(xì)胞周期阻滯于Gl期。我們用流式細(xì)胞術(shù)檢測AnnexinV和PI標(biāo)記的CsA處理后的乳腺癌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)CsA并不明顯誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，主要是直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞壞死。第二部分：CsA通過下調(diào)乳腺癌細(xì)胞PKM2的表達(dá)和活性抑制腫瘤細(xì)胞的生長我們采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測了丙酮酸激酶在正常乳腺細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞mRNA表達(dá)水平上的差異，用westernblot檢測了PKM2在蛋白水平上的表達(dá)。結(jié)果顯示，正常乳