應(yīng)用RNA干擾下調(diào)MARCH6抑制乳腺癌細(xì)胞惡性增殖的體外研究.pdf

1、目的:
　　應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)，在乳腺癌MCF-7細(xì)胞中沉默MARCH6基因表達(dá)，研究其對MCF-7細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響。
　　方法:
　　1、靶向MARCH6基因的shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后，熒光顯微鏡下觀察熒光量驗證轉(zhuǎn)染效率，將轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后的慢病毒液感染MCF-7細(xì)胞，沉默MARCH6基因表達(dá)，熒光顯微鏡下觀察熒光量，初步判斷沉默效果;
　　2、Real-time PCR和Wes

2、tern blot驗證被MARCH6 shRNA慢病毒感染后的MCF-7細(xì)胞中MARCH6在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的表達(dá);
　　3、MTT、BrdU細(xì)胞增殖實驗檢測MARCH6 shRNA慢病毒感染后MCF-7細(xì)胞后，該細(xì)胞的增殖狀況;PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布，闡明MARCH6下調(diào)后對MCF-7細(xì)胞增殖能力和細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果:
　　1、通過在熒光顯微鏡下觀察，MARCH6 shRNA慢病毒質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染2

3、93T細(xì)胞，與同明視野對比，可見70％左右的細(xì)胞帶綠色熒光;通過熒光顯微鏡觀察，初步判斷慢病毒液成功感染MCF-7細(xì)胞，與同明視野對比，90％的細(xì)胞均帶綠色熒光;
　　2、Western Blot和Real-Time PCR驗證了MARCH6 shRNA慢病毒感染MCF-7細(xì)胞后，MARCH6在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平表達(dá)顯著下降;
　　3、MTT實驗、BrdU法結(jié)果顯示MARCH6基因沉默組的MCF-7細(xì)胞增殖顯著下降(p＜0.