沙棘籽渣黃酮對(duì)人乳腺癌細(xì)胞增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)的研究.pdf

1、華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文沙棘籽渣黃酮對(duì)人乳腺癌細(xì)胞增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)的研究姓名：毛玉昌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：錢旻章平20050501沙韓籽渣黃酮對(duì)人乳腺癌細(xì)胞增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)的研究抑制人乳腺癌細(xì)胞Bcap37的增殖，這種增殖抑制效應(yīng)可通過(guò)多途徑、多靶點(diǎn)的調(diào)節(jié)而實(shí)現(xiàn)。本課題在凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)的研究中，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)定量分析FHR作用以后Bcap37細(xì)胞的凋亡率，透射電鏡觀察細(xì)胞核形態(tài)的變化，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)

2、DNALadder現(xiàn)象，以驗(yàn)證FHR對(duì)Bcap37的凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)。并對(duì)細(xì)胞凋亡的線粒體通路進(jìn)行研究，探討線粒體通路與FHR誘導(dǎo)Bcap37凋亡的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)FHR作用Bcap37細(xì)胞24h后，亞G1期細(xì)胞比例隨著FHR的濃度升高而增加，所占比例從163％升高到834％，且G2／M期細(xì)胞的比例也有所提高。1000Itg／ml作用24h后，G0／G1期細(xì)胞比例降至3263％，S期的細(xì)胞比例高達(dá)3562％。透射電鏡觀察到對(duì)照組細(xì)胞核膜完整，

3、核形正常，核質(zhì)均勻，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核染色質(zhì)均出現(xiàn)邊集化現(xiàn)象，1000gg／ml濃度組細(xì)胞周圍可清楚地觀察到細(xì)胞膜向外突出形成凋亡小體。FHR(1000IIg／m1)作用Bcap37細(xì)胞24h后，可見(jiàn)較明顯的DNA片段化現(xiàn)象，而對(duì)照組無(wú)此現(xiàn)象出現(xiàn)。熒光顯微鏡定性檢測(cè)到發(fā)生線粒體跨膜電位損耗的細(xì)胞隨著沙棘籽渣黃酮作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增多。流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)結(jié)果顯示在FHR(1000“g／m1)作用2h后線粒體發(fā)生跨膜電位損耗的細(xì)胞比例為25％，但是

4、在4h時(shí)又下降為12％，在其后的4個(gè)小時(shí)內(nèi)這一比例持續(xù)增加，到作用8h達(dá)到最高為61％，，之后這一比例又下降，作用24h時(shí)為20％。HPLC檢測(cè)結(jié)果顯示與對(duì)照組相比Bcap37細(xì)胞在FHR作用3h和8h后線粒體細(xì)胞色素C分別為對(duì)照組的80％和54％。Caspasc9的酶活在FHR(1000lg／m1)作用0h、3h和8h后分別為O087士0003、0154士0001和O214士0002，分別為對(duì)照組的177倍和2，46倍。證實(shí)線粒體通路